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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 天然药物化学 » 柱层析损失样品太多，怎么办
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叶落雨枯

新虫 (正式写手)

[交流] 柱层析损失样品太多，怎么办

我每次上柱层析，感觉下来的量都很少，一个上了35g样，只下来了10g；一个上了15g样品，之下来6g；一个上了6g样品，下来了有两三克吧，感觉这个还算多的；现在上了个小柱，1g样品，估计只下来了几十毫克。为什么会损失这么多样品啊，怎样能减少损失？？？
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1楼2012-09-05 21:57:27
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西安事变

木虫 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
柱层析损失大，得率低，无非是样品被吸附的过多，而吸附之所以太多，可能是样品极性太大，或者层析拖的时间过长，或者两者兼而有之。如果主要是前者，那么可以考虑用反相柱或者大孔吸附树脂，如果是时间太久造成的，可以考虑首先快速划段，把样品分成有代表性的几个部分，然后针对目标成分来细分。不能指望在一根层析柱上把多个极性不同的化合物逐个洗脱下来，那样耗时太久，不现实。
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17楼2012-09-07 12:10:55
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普通回帖

dmm1111

新虫 (小有名气)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
leecius: 金币+1, 谢谢参与。 2012-09-06 09:18:23
硅胶吸附严重，可以湿法上样，或者用葡聚糖柱子可以减少损失
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2楼2012-09-05 23:03:34
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wangfei.ac

铁杆木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
leecius: 金币+1, 谢谢参与。 2012-09-06 09:18:28
不宜洗脱过长的时间，时间越长，死吸附越严重；极性中等或中等偏大的，还是采用反相材料为好，损失小。
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3楼2012-09-06 08:41:27
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叶落雨枯

新虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by dmm1111 at 2012-09-05 23:03:34
硅胶吸附严重，可以湿法上样，或者用葡聚糖柱子可以减少损失

谢谢！我一直都是采用的拌样的方法， 干法湿法对样品没有什么要求吗，是不是只要溶解性好的都可以采用湿法上样
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4楼2012-09-06 08:58:32
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叶落雨枯

新虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by wangfei.ac at 2012-09-06 08:41:27
不宜洗脱过长的时间，时间越长，死吸附越严重；极性中等或中等偏大的，还是采用反相材料为好，损失小。

谢谢！我看有个说法是每个梯度洗4-8个柱体积，可是我的量本来就下来的少，要是只洗4-8个柱体积的话那够用吗，我刚开始洗大柱子的时候老板说要洗到化学检测没反应后才换下一个比例，所以后来我就一直是洗到没东西时才换的比例，但是后来发现这样洗下来的东西也很少而且花费时间太长，
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5楼2012-09-06 09:04:49
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dmm1111

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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4楼: Originally posted by 叶落雨枯 at 2012-09-06 08:58:32
谢谢！我一直都是采用的拌样的方法， 干法湿法对样品没有什么要求吗，是不是只要溶解性好的都可以采用湿法上样...

在样品量比较小的时候湿法上样比较好，样品量太大这种方法就不太适合，或者你可以采用半干法上样
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6楼2012-09-06 11:34:13
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叶落雨枯

新虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by dmm1111 at 2012-09-06 11:34:13
在样品量比较小的时候湿法上样比较好，样品量太大这种方法就不太适合，或者你可以采用半干法上样...

谢谢！什么叫半干法上样
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7楼2012-09-06 11:35:23
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dmm1111

新虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
叶落雨枯: 金币+2 2012-09-08 10:08:40
引用回帖:
7楼: Originally posted by 叶落雨枯 at 2012-09-06 11:35:23
谢谢！什么叫半干法上样...

先把硅胶用溶剂浸湿上柱，待硅胶沉降均匀之后把拌好硅胶的样品上柱，这样有助于样品走的均匀，分层效果比较好
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8楼2012-09-06 13:50:51
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氢化大雪

木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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2楼: Originally posted by dmm1111 at 2012-09-05 23:03:34
硅胶吸附严重，可以湿法上样，或者用葡聚糖柱子可以减少损失

弱弱地问一句湿法上样为什么就可以减少损失呢，求解释
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9楼2012-09-06 19:33:28
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206patjie

银虫 (小有名气)
★ ★
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karl2100: 金币+1, 谢谢回复！ 2012-09-06 23:03:30
如果你的东西不难分的话 就相对加大一下溶剂极性或加压过柱
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10楼2012-09-06 21:48:55
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liupengp02

金虫 (正式写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
karl2100: 金币+1, 谢谢发言！ 2012-09-06 23:04:02
样品在比较纯时不宜用硅胶了，尤其是量小时，可以试试其他的填料。
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11楼2012-09-06 22:01:12
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liupengp02

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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5楼: Originally posted by 叶落雨枯 at 2012-09-06 09:04:49
谢谢！我看有个说法是每个梯度洗4-8个柱体积，可是我的量本来就下来的少，要是只洗4-8个柱体积的话那够用吗，我刚开始洗大柱子的时候老板说要洗到化学检测没反应后才换下一个比例，所以后来我就一直是洗到没东西时 ...

我刚开始洗大柱子的时候老板说要洗到化学检测没反应后才换下一个比例

向你学习哈。在梯度洗脱时，用一个比例洗，极性大的不是洗不下来，是洗脱很慢，一直用一个比例洗，很难洗到向你老师说的（ 我刚开始洗大柱子的时候老板说要洗到化学检测没反应后才换下一个比例  ）
你说呢，向你请教。
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12楼2012-09-06 22:04:35
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axiu3961

捐助贵宾 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
是吸附了还是反应掉了,还是都有?.知道原因才好对证下药
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14楼2012-09-06 22:20:09
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叶落雨枯

新虫 (正式写手)
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14楼: Originally posted by axiu3961 at 2012-09-06 22:20:09
是吸附了还是反应掉了,还是都有?.知道原因才好对证下药

怎么看是吸附了还是反应了啊，谢谢！
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15楼2012-09-07 11:00:54
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叶落雨枯

新虫 (正式写手)
引用回帖:
11楼: Originally posted by liupengp02 at 2012-09-06 22:01:12
样品在比较纯时不宜用硅胶了，尤其是量小时，可以试试其他的填料。

谢谢！我的样品点薄层板时显示两个主斑点，但是还有没有其他副斑点就不知道了，我们实验好像除了硅胶就只有聚酰胺和大孔树脂了，这两个应该是都不能用于分单体的吧
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16楼2012-09-07 11:06:14
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叶落雨枯

新虫 (正式写手)
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17楼: Originally posted by 西安事变 at 2012-09-07 12:10:55
柱层析损失大，得率低，无非是样品被吸附的过多，而吸附之所以太多，可能是样品极性太大，或者层析拖的时间过长，或者两者兼而有之。如果主要是前者，那么可以考虑用反相柱或者大孔吸附树脂，如果是时间太久造成的， ...

非常感谢您的回帖！再请教一个问题，无论是划段还是收集，是要把前一个比例的都洗完了再换下一个比例，还是只需要收集一定的体积就可以？
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18楼2012-09-07 12:17:53
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ninujuki

禁虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
本帖内容被屏蔽
19楼2012-09-07 13:15:29
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search8699

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
5楼: Originally posted by 叶落雨枯 at 2012-09-06 09:04:49
谢谢！我看有个说法是每个梯度洗4-8个柱体积，可是我的量本来就下来的少，要是只洗4-8个柱体积的话那够用吗，我刚开始洗大柱子的时候老板说要洗到化学检测没反应后才换下一个比例，所以后来我就一直是洗到没东西时 ...

有时候并不能单纯的去看柱体积。你就用梯度洗，然后检测，知道你需要的点下来了就好了。 如果你是很粗的样的话，吸附的多点也很正常啊，毕竟不溶解的杂质什么的比较多
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20楼2012-09-07 14:31:21
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叶落雨枯

新虫 (正式写手)
引用回帖:
19楼: Originally posted by ninujuki at 2012-09-07 13:15:29
有条件还是买一点凝胶填料，不损失样品，我一直用的凝胶柱，对于量少的上硅胶柱会被吸附完的。

这样啊，那看来这次的能有几十毫克就不错了
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21楼2012-09-07 20:52:36
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西安事变

木虫 (职业作家)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
叶落雨枯: 金币+2 2012-09-08 10:09:00
引用回帖:
18楼: Originally posted by 叶落雨枯 at 2012-09-07 12:17:53
非常感谢您的回帖！再请教一个问题，无论是划段还是收集，是要把前一个比例的都洗完了再换下一个比例，还是只需要收集一定的体积就可以？...

我的经验吧，首先根据TLC来判断，用哪个比例的溶剂洗脱哪几个成分。柱层析的时候，对接收的流分再用TLC检测，如果目标成分已经比较少了，就该及时增加极性，进入下一个段了，不要指望能切得干净利索一点交叉都没有，那要求很高的经验值，只有做的足够多了才能达到这种境界。当你一心等着前一个极性段的成分完全流出时，往往事与愿违，相邻的极性段已经下来了。至于收集一定的体积，这同样要根据样品的量、柱子的规模以及洗脱的进展情况来调整，不能太死板。
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22楼2012-09-07 22:16:11
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叶落雨枯

新虫 (正式写手)
引用回帖:
22楼: Originally posted by 西安事变 at 2012-09-07 22:16:11
我的经验吧，首先根据TLC来判断，用哪个比例的溶剂洗脱哪几个成分。柱层析的时候，对接收的流分再用TLC检测，如果目标成分已经比较少了，就该及时增加极性，进入下一个段了，不要指望能切得干净利索一点交叉都没有 ...

谢谢！了解了不 少，不过还是很模糊，看来还得在试验中不断摸索
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23楼2012-09-08 10:04:37
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ldy1985

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
请问你这个上样35g，用了多少的硅胶，是不是得好几百克呀
再就是收集液你一般都是怎么处理的了，用旋蒸么？
谢谢！
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24楼2013-03-19 20:54:24
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叶落雨枯

新虫 (正式写手)
引用回帖:
24楼: Originally posted by ldy1985 at 2013-03-19 20:54:24
请问你这个上样35g，用了多少的硅胶，是不是得好几百克呀
再就是收集液你一般都是怎么处理的了，用旋蒸么？
谢谢！

谢谢！这个具体上了多少硅胶我忘了，应该是根据书上的那个比例来的。收集液确实使用的旋蒸，我们那儿只有旋蒸
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25楼2013-03-21 12:32:10
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张广玉417

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
5楼: Originally posted by 叶落雨枯 at 2012-09-06 09:04:49
谢谢！我看有个说法是每个梯度洗4-8个柱体积，可是我的量本来就下来的少，要是只洗4-8个柱体积的话那够用吗，我刚开始洗大柱子的时候老板说要洗到化学检测没反应后才换下一个比例，所以后来我就一直是洗到没东西时 ...

看到这一楼我就知道你为什么少了 ，每个梯度2个体积就是最好了，你太多了的话肯定吸附，别的原因都不用看不用找，就是这个原因。我们要求走完死体积3个小时之内把柱子过下来。
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26楼2015-06-11 21:33:35
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ly105283662113楼
2012-09-06 22:07   回复  
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