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叶落雨枯

新虫 (正式写手)

应助: 4 (幼儿园)
金币: 1160.8
帖子: 465
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虫号: 1945657

[交流] 柱层析损失样品太多，怎么办

我每次上柱层析，感觉下来的量都很少，一个上了35g样，只下来了10g；一个上了15g样品，之下来6g；一个上了6g样品，下来了有两三克吧，感觉这个还算多的；现在上了个小柱，1g样品，估计只下来了几十毫克。为什么会损失这么多样品啊，怎样能减少损失？？？

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1楼 2012-09-05 21:57:27

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西安事变

木虫 (职业作家)

应助: 15 (小学生)
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帖子: 3086
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虫号: 513642

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
叶落雨枯: 金币+2 2012-09-08 10:09:00

引用回帖:

18楼: Originally posted by 叶落雨枯 at 2012-09-07 12:17:53
非常感谢您的回帖！再请教一个问题，无论是划段还是收集，是要把前一个比例的都洗完了再换下一个比例，还是只需要收集一定的体积就可以？...

我的经验吧，首先根据TLC来判断，用哪个比例的溶剂洗脱哪几个成分。柱层析的时候，对接收的流分再用TLC检测，如果目标成分已经比较少了，就该及时增加极性，进入下一个段了，不要指望能切得干净利索一点交叉都没有，那要求很高的经验值，只有做的足够多了才能达到这种境界。当你一心等着前一个极性段的成分完全流出时，往往事与愿违，相邻的极性段已经下来了。至于收集一定的体积，这同样要根据样品的量、柱子的规模以及洗脱的进展情况来调整，不能太死板。