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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » 极性特别小，保留时间特别接近的怎么用hplc分离
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lzdx

木虫 (正式写手)

[求助] 极性特别小，保留时间特别接近的怎么用hplc分离

RT，C8柱，用很大比例乙腈冲十多分钟才能出峰，基本上完全分不开的两个峰，有什么办法能分开啊
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1楼2012-08-31 17:36:32
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

bcschina

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
lzdx: 金币+3 2012-09-03 15:13:50
xbqewpq: 金币+3, 感谢应助，欢迎常来分析版交流 ^ ^ 2012-09-04 14:34:42
要分开两个峰 不是靠一味增加柱子的保留能力 楼上虫友的建议有些情况下是对的 但显然不适用楼主这个case  问题的关键是要了解两个峰物质的差异和特性在哪里  然后再选择合适的柱子类型  再就是选择合适的柱子规格。听好了 以下才是真正高手的建议  哈哈 ：
1.先选择一个梯度 当然是高乙腈或者高乙醇的  看看乙腈和甲醇的梯度洗脱下  哪个分离效果更好  做到心中有底 梯度洗脱在无法找到高效柱子的时候  是一个很好的提高柱效的补救办法  不要只顾用乙腈  甲醇也可以试试；
2.不需再要换普通C18 因为这样对两个物质的保留能力都再提升 长的保留时间反而会使两个峰重叠更厉害   个人推荐碳8亚2微米的短柱 不要小看这类短柱 柱效是很赞的 亚2微米可保证柱效 而且短柱确保缩短保留时间 当然 你的HPLC的系统必须是适合亚2微米的  注意连线的管径大小和真空机以及系统背压   
3.以上还是不行  就要考虑换不同固定相的柱子 氰基柱 氨基柱  这些保留能力都比C8稍弱  但很可能适宜你两物质的分离  还有要注意是否是羟基封端  有时也会影响保留能力
以上  希望对你有用
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5楼2012-09-03 14:11:52
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guevara1967

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
soundhorizo: 金币+2, 应助辛苦 ^^ 2012-09-01 11:28:58
换柱子，建议采用含碳量较高的色谱柱

即使同样是C18色谱柱，不同厂家的柱子，同一厂家不同型号的柱子，含碳量不一样，你的情况适宜选择含碳量较高的色谱柱来试一下
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梦想、激情、灵感、体验--che
2楼2012-09-01 09:18:14
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lihuan0525

金虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
建议用C18柱子试试，因为含碳量高相对的保留时间会厂。
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3楼2012-09-03 08:57:39
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mxx7456

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

少加乙腈看看主峰时间能否分开，不要怕时间长，大不了加流速。。
或者换柱子，多换一些。。我那时也是做各释放度要60分钟一针，试了实验室所有柱子都不行。。最后借别人的柱子可以控制再30
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13楼2012-09-04 17:21:17
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普通回帖

lzdx

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by lihuan0525 at 2012-09-03 08:57:39
建议用C18柱子试试，因为含碳量高相对的保留时间会厂。

试了啊，C18效果更不好啊，因为要百分之九十的乙腈都得好久才能出峰，完全分不开，不知道怎么调整条件啊
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4楼2012-09-03 10:13:41
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残暴的肉球

(文坛精英)

小弟一枚

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
1、梯度
2、反相柱
3、改变温度
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注册执考刚开张，此处光景很荒凉。要问如何才能火？多来逛逛~
6楼2012-09-03 14:20:46
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lzdx

木虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 残暴的肉球 at 2012-09-03 14:20:46
1、梯度
2、反相柱
3、改变温度

乙腈90%都要冲二十分钟才能出来啊，还怎么调整梯度，而且就是用的反相柱子啊。C18，C8，温度变化好像影响不大
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7楼2012-09-03 15:12:12
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lzdx

木虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by bcschina at 2012-09-03 14:11:52
要分开两个峰 不是靠一味增加柱子的保留能力 楼上虫友的建议有些情况下是对的 但显然不适用楼主这个case  问题的关键是要了解两个峰物质的差异和特性在哪里  然后再选择合适的柱子类型  再就是选择合适的柱子规格。 ...

非常感谢你的建议，我会试试的
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8楼2012-09-03 15:13:38
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bcschina

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

大家注意 HPLC中温度只有一个功能  绝对不是改善分离   哈哈  坛子里很多虫友应该多看看书啊   告诉你 温度唯一的功能 就只是改善降低系统背压  而且降低的幅度很有限  所以  改变温度在这里根本没有用  不要问我为什么可以降压这么幼稚的问题   别说你不懂  
关于楼主的梯度  个人意见是可以配置一瓶80%的乙腈和100%乙腈   走梯度  慢慢切换至纯乙腈    同样的用甲醇也可以一试   看看梯度对出峰是否有改善   你的case可能换柱子效果会更好些  除了固定相  规格也很重要  一定要注意
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9楼2012-09-04 12:30:20
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xp_best

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
9楼: Originally posted by bcschina at 2012-09-04 12:30:20
大家注意 HPLC中温度只有一个功能  绝对不是改善分离   哈哈  坛子里很多虫友应该多看看书啊   告诉你 温度唯一的功能 就只是改善降低系统背压  而且降低的幅度很有限  所以  改变温度在这里根本没有用  不要问我为 ...

貌似柱温箱的功能不像你说的那么少吧 要是用温敏色谱柱分离的话 那就~呵呵
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10楼2012-09-04 14:05:00
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