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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » 极性特别小，保留时间特别接近的怎么用hplc分离
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kaven186

银虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by lzdx at 2012-09-03 15:13:38
非常感谢你的建议，我会试试的...

哥们  降低柱温是可以增加选择因子的，选择因子对分离度是影响最大的因素。
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广州
11楼2012-09-04 17:06:27
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kaven186

银虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by bcschina at 2012-09-04 12:30:20
大家注意 HPLC中温度只有一个功能  绝对不是改善分离   哈哈  坛子里很多虫友应该多看看书啊   告诉你 温度唯一的功能 就只是改善降低系统背压  而且降低的幅度很有限  所以  改变温度在这里根本没有用  不要问我为 ...

柱温室有影响的，比如降低柱温就可以增加选择因子，选择因子对分离度的影响是最大的。
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广州
12楼2012-09-04 17:09:03
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mxx7456

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

少加乙腈看看主峰时间能否分开，不要怕时间长，大不了加流速。。
或者换柱子，多换一些。。我那时也是做各释放度要60分钟一针，试了实验室所有柱子都不行。。最后借别人的柱子可以控制再30
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13楼2012-09-04 17:21:17
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274733171

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

正如上述高手所给的建议，若分离度无明显改善.楼主不妨考虑用正相色谱 用正相色谱所具备的条件楼主应该懂得....
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14楼2012-09-04 20:42:38
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bcschina

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

温敏色谱柱   会有色谱柱对温度敏感吗  抱歉从来没有听说过  也许会有样品对温度敏感  推测可能是蛋白质类的样品  楼主的case  你觉得会是吗  用你的脚想想吧  我已不做色谱好多年  老矣  ：）
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15楼2012-09-05 16:48:00
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bcschina

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

大家对我的反驳 提到了选择因子  抱歉本人才学疏浅  按照我的理解 实际上就是不同温度下 溶剂对样品的溶解度的差异  导致溶剂对不同样品洗脱能力的改变  导致样品先后出峰分离   不要弄那么玄乎的专业名词啦 哈哈 注意  楼主的case是保留时间太长 溶剂是几乎全有机相溶剂  难道你要楼主升温到100度以上来改善淋洗能力吗  即便升温了  我保证那两峰还是在一起重叠的 不要忘了 升温是对流动的混合传质有利的 温度越高 时间越长 越容易重叠 因为分子间的扩散会加剧  固定相保留能力更加弱了   唉  用脚趾头想想吧   我真的老了 跟你们这些小辈们较什么劲  ：）
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16楼2012-09-05 16:57:12
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yurong818

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
17楼2012-09-06 10:59:29
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723889072

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

根据楼主的描述，两种分析物的极性很弱，不建议走正相，因为分析物很可能在死时间就都出来了。鉴于大比例有机相保留时间还那么长，建议使用碳链短一点（如苯基柱or氰基柱）或长度短一点的色谱柱；还可以通过调节pH值或调整缓冲液浓度改变分析物的保留……
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活到老学到老
18楼2012-11-26 10:18:53
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