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475502411

铜虫 (著名写手)

[求助] 关于稀有密码子的优化,请求大家指教

我的目的基因和载体连接上,是异源表达,怎么都表达不出来,就查看了常见的原因,结果发现序列存在很多的稀有密码子,现在想优化后化学合成,我没有做过这方面的,是不是直接把稀有密码子换成大肠杆菌偏爱密码子就可以刻呢?会不会影响表达出来蛋白的构象啊?要注意什么呢?表达菌株是BL21。
希望能给我提点建议
谢谢
我的序列,请大侠帮我看看
atggagagcacaacatcaggattcctaggacccctgctcgtgttacaggcggggtttttcttgttgacaagaatcctcacaataccacagagtctagactcgtggtggacttctctcaattttctagggggagcacccacgtgtcctggccaaaattcgcagtccccaacctccaatcactcaccaacctcttgtcctccaacttgtcctggctatcgctggatgtgtctgcggcgttttatcatattcctcttcatcctgctgctatgcctcatcttcttgttggttcttctggactaccaaggtatgttgcccgtttgtcctctacttccaggaacatcaactaccagcacgggaccatgcagaacctgcacgattcctgctcaaggaacctctatgtttccctcttgttgctgtacaaaaccttcggacggaaactgcacttgtattcccatcccatcatcctgggctttcgcaagattcctatgggagtgggcctcagtccgtttctcctggctcagtttactagtgccatttgttcagtggttcgtagggctttcccccactgtttggctttcagctatatggatgatgtggtattgggggccaagtctgtacaacatcttgagtccctttttacctctattaccaattttcttttgtctttgggtatacatt
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可以朝九晚五,也能浪迹天涯
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475502411

铜虫 (著名写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by yandz680717 at 2012-08-29 14:29:59
并不是把密码子改成大肠杆菌偏爱的密码子就ok了,还要做RNA二级结构分析。建议你请合成引物或者基因的公司给你优化

那用不用考虑所选择的载体?宿主?
谢谢
可以朝九晚五,也能浪迹天涯
8楼2012-08-30 08:59:41
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lintaosong

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
475502411: 金币+10 2012-08-29 13:17:04
给你个网站 这里你可以自己按照表达载体进行优化http://www.kazusa.or.jp/codon/
2楼2012-08-29 11:54:30
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475502411

铜虫 (著名写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by lintaosong at 2012-08-29 11:54:30
给你个网站 这里你可以自己按照表达载体进行优化http://www.kazusa.or.jp/codon/

但是打开第一栏就是输入物种,我用的是BL21,但是我不知道应该是属于大肠杆菌的那个分类?
敬请指点!
不好意思我这个实在不懂,见谅
可以朝九晚五,也能浪迹天涯
3楼2012-08-29 13:16:56
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475502411

铜虫 (著名写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by lintaosong at 2012-08-29 11:54:30
给你个网站 这里你可以自己按照表达载体进行优化http://www.kazusa.or.jp/codon/

我用的载体是PET-28a,宿主是BL2,能不能给我写一下操作步骤呢?谢谢
可以朝九晚五,也能浪迹天涯
4楼2012-08-29 13:18:49
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