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南海所老龚

新虫 (正式写手)

[求助] 线粒体基因控制区CR含重复序列,为什么PCR产物直接测序不准,而要纯化或者克隆再测序已有1人参与

各位虫友好!
我是做鱼类线粒体基因的,提,问题如题:线粒体基因控制区CR含重复序列,为什么PCR产物直接测序不准,而要纯化或者克隆再测序?希望大家多交流,谢谢!
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测序相关问题 重复序列PCR扩增

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TheBestandMostBeautifulThingsintheWorldCan'tBeSeenorTouched,TheyMustBeFeltwithHeart.
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南海所老龚

新虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by mitocam at 2012-08-27 11:49:10
测序当然要纯的底物才行。你的样品有不同的序列混在一起,怎么能够将各自的序列分别区别开?

谢谢应助,但是我的问题是为什么相对非控制区序列,含重复序列就测不准呢?
TheBestandMostBeautifulThingsintheWorldCan'tBeSeenorTouched,TheyMustBeFeltwithHeart.
7楼2012-08-29 08:49:03
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mitocam

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
测序当然要纯的底物才行。你的样品有不同的序列混在一起,怎么能够将各自的序列分别区别开?
2楼2012-08-27 11:49:10
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gwd0312

木虫 (正式写手)

“无冕之王”

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
PCR 过程中会产生一些非特异的产物,需要再次克隆将其筛除,尽管如此,你的测序产物也不可避免的含有你不想要的东东!!
持之以恒、永不放弃!
3楼2012-08-27 12:30:55
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lidonghong

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我个人觉得这个重复序列是你测序不准的原因,让公司在此区域设计测序引物进行双向测序,然后拼接,看看结果如何。
生物化学与分子生物学
4楼2012-08-28 11:50:18
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