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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 平板涂布要等到琼脂凝固到什么程度啊
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胡小喜

新虫 (小有名气)

[交流] 平板涂布要等到琼脂凝固到什么程度啊

最近开始做微生物，听说涂布法比倒平板法好，所以用平板法，第一次涂布时我等琼脂凝固七八成时加100ul涂布，结果琼脂被涂破了，第二次我等了1h后去涂布，琼脂比较结实，没涂破，结果涂完后，等30min去取时，发现琼脂表面有菌液在移动，像没有被琼脂吸收一样，这该怎么办呀，我怕一倒置，菌液都流到培养皿盖了。望有经验的人指导下啊！菌液要减少用量吗，还是说不要琼脂太凝固了才接种？那样的话一涂布琼脂就花了呀
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1楼2012-08-22 20:21:27
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)
★
胡小喜(金币+1): 谢谢参与
等平板凝固完全之后再涂，要不然会破。菌液当然也是不能太多的，最好是能够涂均匀整块平板，一边涂一边计时，一分钟能干就好。不能吹干，因为菌液集中会长成几个微生物长在一起，分不开，所以最好是一直涂到干才停。
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3楼2012-08-23 05:49:26
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jayzhao520

木虫 (正式写手)
★
胡小喜(金币+1): 谢谢参与
灭菌后可以先把培养基放到60度水浴锅里，等温度降下来再倒平板，凝固的时候可以半开盖，防止在顶部凝结水珠，凝没凝固肉眼可以看出来的，凝固后就可以涂布了，反复涂，转着涂，涂完了就翻过来了
不过个人认为计数的话，还是倒平板比较好
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4楼2012-08-23 08:54:38
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damaomao

禁虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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6楼2012-08-23 09:34:24
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普通回帖

hotchange

金虫 (小有名气)
★
胡小喜(金币+1): 谢谢参与
我一般半开盖，等到雾气不变多开始涂…

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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2楼2012-08-22 20:55:41
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yang824

木虫 (小有名气)
★
胡小喜(金币+1): 谢谢参与
我一般将倒完的平板放在培养箱中检菌一晚上，然后再涂板，这样没有水珠，而且涂布时候也非常容易将菌涂匀
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5楼2012-08-23 09:00:44
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胡小喜

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by hotchange at 2012-08-22 20:55:41
我一般半开盖，等到雾气不变多开始涂…

这样会不会污染啊?
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7楼2012-08-23 09:36:36
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胡小喜

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by jayzhao520 at 2012-08-23 08:54:38
灭菌后可以先把培养基放到60度水浴锅里，等温度降下来再倒平板，凝固的时候可以半开盖，防止在顶部凝结水珠，凝没凝固肉眼可以看出来的，凝固后就可以涂布了，反复涂，转着涂，涂完了就翻过来了
不过个人认为计数的 ...

确实，上面有一层水珠，我就是老怕污染，所以都不敢打开盖子啊，下次试试你说的，100ul应该不算多吧，你一般涂多少啊，谢谢！
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8楼2012-08-23 09:38:57
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1988fannyPP

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我一般只涂20ul，100有点多了，很难干
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9楼2012-08-23 10:10:16
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hotchange

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
7楼: Originally posted by 胡小喜 at 2012-08-23 02:36:36
这样会不会污染啊?...

不会啊，在酒精灯旁操作一般没问题…

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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10楼2012-08-23 10:21:31
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wanglei512

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2012-08-23 05:49:26
等平板凝固完全之后再涂，要不然会破。菌液当然也是不能太多的，最好是能够涂均匀整块平板，一边涂一边计时，一分钟能干就好。不能吹干，因为菌液集中会长成几个微生物长在一起，分不开，所以最好是一直涂到干才停。

倒板子要在超净工作台里面进行，等到不烫手的时候再倒，产生的雾气和水珠很少，而且把盖子打开一半。凝固很快的，不到10分钟就好了。如果雾气还很多，可以放到培养箱里孵育上30min-1h。新倒的板子就是不好凃干，涂得时间稍微长一点，如果在冰箱（4度）放上3天左右，不到30S就干了。板子容易涂破，一是你的琼脂加少了或者板子倒的太薄、太厚。二是你涂得手法不太好，时间长了就好了。我们一般200ML里加3g琼脂。300ML倒7-8个板子（90的）
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11楼2012-08-24 09:11:57
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王贤卓

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
涂布当然要小心，别把琼脂弄破了。至于培养基要干到什么程度，只要它干了就行，多用L行涂布棒涂布。
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12楼2012-08-24 09:43:33
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jayzhao520

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
8楼: Originally posted by 胡小喜 at 2012-08-23 09:38:57
确实，上面有一层水珠，我就是老怕污染，所以都不敢打开盖子啊，下次试试你说的，100ul应该不算多吧，你一般涂多少啊，谢谢！...

我也涂过100微升，可以涂干的，涂一会转90度，四个方向涂
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13楼2012-08-24 10:54:53
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laozuzunzhe

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
50ul就差不多了，琼脂在40度以下就凝固了，如果容易破，你可以把琼脂的量加多一点，这样就不容易破了，我一般会把琼脂量加到2.4%
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14楼2012-08-24 11:55:35
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chengjg

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
11楼: Originally posted by wanglei512 at 2012-08-24 09:11:57
倒板子要在超净工作台里面进行，等到不烫手的时候再倒，产生的雾气和水珠很少，而且把盖子打开一半。凝固很快的，不到10分钟就好了。如果雾气还很多，可以放到培养箱里孵育上30min-1h。新倒的板子就是不好凃干，涂 ...

300ML倒7-8个板子（90的）

也倒得太多了吧，一般90的 一个倒15到20毫升就足够吧
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15楼2012-09-29 09:53:16
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beishui

金虫 (小有名气)
★
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我觉得你可以倒完平板把盖子半开着，在超净台中吹风，半个小时后直接涂布，这样的话100ul很快可以涂干
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16楼2012-09-29 14:27:38
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zzjcust

铁杆木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
送鲜花一朵
建议将所用涂布液配浓一点，减少涂布液体积，同时，涂布后适当等待后再倒置
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17楼2012-09-29 16:38:05
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zzjcust

铁杆木虫 (正式写手)
建议将所用涂布液配浓一点，减少涂布液体积，同时，涂布后适当等待后再倒置
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18楼2012-09-29 16:38:29
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黑色de星期⑧

金虫 (初入文坛)
★
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我一般是100ml的培养基倒5个板，一个板里加80微升的菌液进行涂布
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19楼2012-10-02 09:54:05
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