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祥云赵

金虫 (小有名气)

[求助] 苹果酶活性测定中无活性,为什么?

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用氮蓝四唑法测定苹果SOD酶活性(负值),双氧水法测CAT酶活性,愈创木酚法测POD酶活性时,吸光值一直没有变化,为什么?
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祥云赵

金虫 (小有名气)

附上具体方法:
1、粗酶液提取,取1g叶片放于预冷的研钵中,并加入8ml 50mmol/LpH=7.8(内含1%pvp)的磷酸缓冲液(LpH=7.8)在冰浴下研磨成浆,将其转移至10ml离心管中,4度下8000转离心10min,上清液即粗酶液。
2、SOD活性测定,测定管中加入1.5ml磷酸缓冲液,0.3ml130mmolMet溶液,0.3ml750umolNBT溶液,100umol/L EDTA-Na2溶液0.3ml,蒸馏水0.5ml(光下对照和暗中对照0.6ml),0.1ml粗酶液,20umol/L核黄素0.3ml(最后加),光下显色反应15min,以暗中对照调零,测定各处理吸光值。
4楼2012-08-22 16:11:40
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miaomiaomao

金虫 (小有名气)


树树8013: 金币+1, 欢迎新虫有发帖交流,欢迎~欢迎~ 2012-08-22 22:14:51
我测定过其他的酶,也出现这种情况,我猜想是不是我的酶抑制剂浓度太高了,刚把酶加进去它就给阻止了
吃嘛嘛香
2楼2012-08-22 11:29:07
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小毛孩24

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
请lz帮具体的实验操作方法写出来便于大家分析。
我猜是lz是提取酶时pvp加的量不够,苹果中多酚含量较高,一般的方法可能有局限。
3楼2012-08-22 15:22:00
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wbx0412

至尊木虫 (职业作家)


树树8013: 金币+1, 谢谢回帖解答交流,欢迎常来 2012-08-22 22:17:33
引用回帖:
4楼: Originally posted by 祥云赵 at 2012-08-22 16:11:40
附上具体方法:
1、粗酶液提取,取1g叶片放于预冷的研钵中,并加入8ml 50mmol/LpH=7.8(内含1%pvp)的磷酸缓冲液(LpH=7.8)在冰浴下研磨成浆,将其转移至10ml离心管中,4度下8000转离心10min,上清液即粗酶液。
2 ...

PVP的量调整一下,我测过黑莓中的β-糖苷酶,时加了PVP反而测不出来。楼主可以考虑一下,或者将粗酶浓缩,提高酶的加入量等方法
5楼2012-08-22 16:52:09
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