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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 食品 » 果蔬 » 苹果酶活性测定中无活性，为什么？
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祥云赵

金虫 (小有名气)

[求助] 苹果酶活性测定中无活性，为什么？

Sample Text
用氮蓝四唑法测定苹果SOD酶活性（负值），双氧水法测CAT酶活性，愈创木酚法测POD酶活性时，吸光值一直没有变化，为什么？
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1楼 2012-08-22 10:08:41
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小毛孩24

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
请lz帮具体的实验操作方法写出来便于大家分析。
我猜是lz是提取酶时pvp加的量不够，苹果中多酚含量较高，一般的方法可能有局限。
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3楼2012-08-22 15:22:00
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miaomiaomao

金虫 (小有名气)
★
树树8013: 金币+1, 欢迎新虫有发帖交流，欢迎~欢迎~ 2012-08-22 22:14:51
我测定过其他的酶，也出现这种情况，我猜想是不是我的酶抑制剂浓度太高了，刚把酶加进去它就给阻止了
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吃嘛嘛香
2楼2012-08-22 11:29:07
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祥云赵

金虫 (小有名气)
附上具体方法：
1、粗酶液提取，取1g叶片放于预冷的研钵中，并加入8ml 50mmol/LpH=7.8(内含1%pvp）的磷酸缓冲液（LpH=7.8）在冰浴下研磨成浆，将其转移至10ml离心管中，4度下8000转离心10min，上清液即粗酶液。
2、SOD活性测定，测定管中加入1.5ml磷酸缓冲液，0.3ml130mmolMet溶液，0.3ml750umolNBT溶液，100umol/L EDTA-Na2溶液0.3ml，蒸馏水0.5ml（光下对照和暗中对照0.6ml），0.1ml粗酶液，20umol/L核黄素0.3ml（最后加），光下显色反应15min，以暗中对照调零，测定各处理吸光值。
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4楼2012-08-22 16:11:40
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wbx0412

至尊木虫 (职业作家)
★
树树8013: 金币+1, 谢谢回帖解答交流，欢迎常来 2012-08-22 22:17:33
引用回帖:
4楼: Originally posted by 祥云赵 at 2012-08-22 16:11:40
附上具体方法：
1、粗酶液提取，取1g叶片放于预冷的研钵中，并加入8ml 50mmol/LpH=7.8(内含1%pvp）的磷酸缓冲液（LpH=7.8）在冰浴下研磨成浆，将其转移至10ml离心管中，4度下8000转离心10min，上清液即粗酶液。
2 ...

PVP的量调整一下，我测过黑莓中的β－糖苷酶，时加了PVP反而测不出来。楼主可以考虑一下，或者将粗酶浓缩，提高酶的加入量等方法
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5楼2012-08-22 16:52:09
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