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761429495

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by xbl3688 at 2012-08-18 19:01:31
ppic-9k应该是酵母的内源质粒吧，像四楼说的，你扩增的时候在上游引物里加上组氨酸标签的序列，克隆出基因后双酶切，连接到这个质粒上就可以了啊。你扩这个质粒上的基因或是片段干嘛呢

引物        长度(bp)        序列（5’→3’）
Xyn-1         25              ATGGTTGCCTTTACTTCCCTTCTCG
Xyn-2        25              TAGCTGACAGTGATGGAAGCAGAGC
亲，我想问一下我给这个上游引物加6个组氨酸标签序列的话，是不是变为
CATCATCATCATCATCATATGGTTGCCTTTACTTCCCTTCTCG组氨酸不是有两个密码子吗，该如何选择呢？
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每一个让你讨厌的现在，都有一个不努力的曾经。
11楼2012-08-20 13:52:31
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761429495

新虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by yandz680717 at 2012-08-20 05:55:15
注意His tag加在N端可能对酶的活性有影响，看看文献

引物        长度(bp)        序列（5’→3’）
Xyn-1         25              ATGGTTGCCTTTACTTCCCTTCTCG
Xyn-2        25              TAGCTGACAGTGATGGAAGCAGAGC
亲，我想问一下我给这个上游引物加6个组氨酸标签序列的话，是不是变为
CATCATCATCATCATCATATGGTTGCCTTTACTTCCCTTCTCG:组氨酸不是有两个密码子吗，该如何选择呢？求指导。。。

。
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12楼2012-08-20 14:22:59
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yandz680717

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

建议histag加在C端，或者两种  C端，N端都考虑。
根据毕氏酵母密码子偏好以及不能出现连续的A，U.
     加 CAT CAT CAT CAT CAT CAT 可以。要克隆到pPIC9K上，你还得加上酶切位点，才能克隆到载体上，注意跟信号肽读码框要融合

    你可以看看pPICZa载体说明，把PDF下下来自己看看，就知道了，http://products.invitrogen.com/ivgn/product/V20520
上面都有说明的，它的histag好像是加在C端.此设计引物时在下游引物上加入Xa因子或肠激酶酶切位点+histag+终止密码子
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13楼2012-08-21 07:01:43
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xbl3688

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
12楼: Originally posted by 761429495 at 2012-08-20 14:22:59
引物        长度(bp)        序列（5’→3’）
Xyn-1         25              ATGGTTGCCTTTACTTCCCTTCTCG
Xyn-2        25              TAGCTGACAGTGATGGAAGCAGAGC
亲，我想问一下我给这个上游引物加6个组 ...

你在引物里加酶切位点了吗？ 六个组氨酸要放在酶切位点后面，引物稍微有点长。
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生活的乐趣在于善于发现美，学会欣赏美
14楼2012-08-21 14:43:31
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