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761429495

新虫 (小有名气)

[求助] 蛋白纯化

求助:木聚糖酶已经在毕赤酵母中表达了,接下来想做酶蛋白纯化,我打算通过PCR重新构建质粒给目的基因加上组氨酸标签,应该以ppic-9k全长基因为模版还是一个片段为模版呢,初学者求指导,谢谢啊:t
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每一个让你讨厌的现在,都有一个不努力的曾经。
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yandz680717

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

建议histag加在C端,或者两种  C端,N端都考虑。
根据毕氏酵母密码子偏好以及不能出现连续的A,U.
     加 CAT CAT CAT CAT CAT CAT 可以。要克隆到pPIC9K上,你还得加上酶切位点,才能克隆到载体上,注意跟信号肽读码框要融合

    你可以看看pPICZa载体说明,把PDF下下来自己看看,就知道了,http://products.invitrogen.com/ivgn/product/V20520
上面都有说明的,它的histag好像是加在C端.此设计引物时在下游引物上加入Xa因子或肠激酶酶切位点+histag+终止密码子
13楼2012-08-21 07:01:43
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查看全部 14 个回答

哈哈大姑爷

至尊木虫 (知名作家)

感谢参与,应助指数 +1
scelab: 应助指数-1, 酱油的 2012-08-17 12:14:35
路过,看看有没有酱油
GO ON
2楼2012-08-16 22:55:19
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761429495

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 哈哈大姑爷 at 2012-08-16 22:55:19
路过,看看有没有酱油

有没有建设性的意见啊
每一个让你讨厌的现在,都有一个不努力的曾经。
3楼2012-08-17 13:37:44
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chlorella409

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你可以在目的基因的一端引物中加上His的编码,重新PCR后和载体片段连接

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

4楼2012-08-17 16:03:09
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