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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 蛋白纯化
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761429495

新虫 (小有名气)

[求助] 蛋白纯化

求助:木聚糖酶已经在毕赤酵母中表达了，接下来想做酶蛋白纯化，我打算通过PCR重新构建质粒给目的基因加上组氨酸标签，应该以ppic-9k全长基因为模版还是一个片段为模版呢，初学者求指导，谢谢啊:t
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每一个让你讨厌的现在，都有一个不努力的曾经。
1楼 2012-08-16 14:13:00
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哈哈大姑爷

至尊木虫 (知名作家)
感谢参与，应助指数 +1
scelab: 应助指数-1, 酱油的 2012-08-17 12:14:35
路过，看看有没有酱油
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ＧＯ　ＯＮ
2楼2012-08-16 22:55:19
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761429495

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 哈哈大姑爷 at 2012-08-16 22:55:19
路过，看看有没有酱油

有没有建设性的意见啊
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每一个让你讨厌的现在，都有一个不努力的曾经。
3楼2012-08-17 13:37:44
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chlorella409

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你可以在目的基因的一端引物中加上His的编码，重新PCR后和载体片段连接
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761429495
4楼2012-08-17 16:03:09
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哈哈大姑爷

至尊木虫 (知名作家)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 761429495 at 2012-08-17 13:37:44
有没有建设性的意见啊...

刚开始做，经验不足，希望以后能够多多交流
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ＧＯ　ＯＮ
5楼2012-08-18 16:46:49
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xbl3688

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
ppic-9k应该是酵母的内源质粒吧，像四楼说的，你扩增的时候在上游引物里加上组氨酸标签的序列，克隆出基因后双酶切，连接到这个质粒上就可以了啊。你扩这个质粒上的基因或是片段干嘛呢
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761429495
生活的乐趣在于善于发现美，学会欣赏美
6楼2012-08-18 19:01:31
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761429495

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by chlorella409 at 2012-08-17 16:03:09
你可以在目的基因的一端引物中加上His的编码，重新PCR后和载体片段连接

O(∩_∩)O谢谢了啊，受教受教
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每一个让你讨厌的现在，都有一个不努力的曾经。
7楼2012-08-19 19:56:06
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761429495

新虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by chlorella409 at 2012-08-17 16:03:09
你可以在目的基因的一端引物中加上His的编码，重新PCR后和载体片段连接

谢谢了啊，受教受教。。。
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每一个让你讨厌的现在，都有一个不努力的曾经。
8楼2012-08-19 20:00:27
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761429495

新虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
6楼: Originally posted by xbl3688 at 2012-08-18 19:01:31
ppic-9k应该是酵母的内源质粒吧，像四楼说的，你扩增的时候在上游引物里加上组氨酸标签的序列，克隆出基因后双酶切，连接到这个质粒上就可以了啊。你扩这个质粒上的基因或是片段干嘛呢

谢谢了啊，受教受教。。。
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每一个让你讨厌的现在，都有一个不努力的曾经。
9楼2012-08-19 20:02:25
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yandz680717

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

注意His tag加在N端可能对酶的活性有影响，看看文献
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10楼2012-08-20 05:55:15
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