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761429495

新虫 (小有名气)

[求助] 蛋白纯化

求助:木聚糖酶已经在毕赤酵母中表达了，接下来想做酶蛋白纯化，我打算通过PCR重新构建质粒给目的基因加上组氨酸标签，应该以ppic-9k全长基因为模版还是一个片段为模版呢，初学者求指导，谢谢啊:t
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每一个让你讨厌的现在，都有一个不努力的曾经。
1楼 2012-08-16 14:13:00
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761429495

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 哈哈大姑爷 at 2012-08-16 22:55:19
路过，看看有没有酱油

有没有建设性的意见啊
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每一个让你讨厌的现在，都有一个不努力的曾经。
3楼2012-08-17 13:37:44
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761429495

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by chlorella409 at 2012-08-17 16:03:09
你可以在目的基因的一端引物中加上His的编码，重新PCR后和载体片段连接

O(∩_∩)O谢谢了啊，受教受教
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每一个让你讨厌的现在，都有一个不努力的曾经。
7楼2012-08-19 19:56:06
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新虫 (小有名气)
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引用回帖:
4楼: Originally posted by chlorella409 at 2012-08-17 16:03:09
你可以在目的基因的一端引物中加上His的编码，重新PCR后和载体片段连接

谢谢了啊，受教受教。。。
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每一个让你讨厌的现在，都有一个不努力的曾经。
8楼2012-08-19 20:00:27
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新虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
6楼: Originally posted by xbl3688 at 2012-08-18 19:01:31
ppic-9k应该是酵母的内源质粒吧，像四楼说的，你扩增的时候在上游引物里加上组氨酸标签的序列，克隆出基因后双酶切，连接到这个质粒上就可以了啊。你扩这个质粒上的基因或是片段干嘛呢

谢谢了啊，受教受教。。。
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每一个让你讨厌的现在，都有一个不努力的曾经。
9楼2012-08-19 20:02:25
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761429495

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by xbl3688 at 2012-08-18 19:01:31
ppic-9k应该是酵母的内源质粒吧，像四楼说的，你扩增的时候在上游引物里加上组氨酸标签的序列，克隆出基因后双酶切，连接到这个质粒上就可以了啊。你扩这个质粒上的基因或是片段干嘛呢

引物        长度(bp)        序列（5’→3’）
Xyn-1         25              ATGGTTGCCTTTACTTCCCTTCTCG
Xyn-2        25              TAGCTGACAGTGATGGAAGCAGAGC
亲，我想问一下我给这个上游引物加6个组氨酸标签序列的话，是不是变为
CATCATCATCATCATCATATGGTTGCCTTTACTTCCCTTCTCG组氨酸不是有两个密码子吗，该如何选择呢？
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每一个让你讨厌的现在，都有一个不努力的曾经。
11楼2012-08-20 13:52:31
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761429495

新虫 (小有名气)
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10楼: Originally posted by yandz680717 at 2012-08-20 05:55:15
注意His tag加在N端可能对酶的活性有影响，看看文献

引物        长度(bp)        序列（5’→3’）
Xyn-1         25              ATGGTTGCCTTTACTTCCCTTCTCG
Xyn-2        25              TAGCTGACAGTGATGGAAGCAGAGC
亲，我想问一下我给这个上游引物加6个组氨酸标签序列的话，是不是变为
CATCATCATCATCATCATATGGTTGCCTTTACTTCCCTTCTCG:组氨酸不是有两个密码子吗，该如何选择呢？求指导。。。

。
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每一个让你讨厌的现在，都有一个不努力的曾经。
12楼2012-08-20 14:22:59
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