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761429495

新虫 (小有名气)

[求助] 蛋白纯化

求助:木聚糖酶已经在毕赤酵母中表达了,接下来想做酶蛋白纯化,我打算通过PCR重新构建质粒给目的基因加上组氨酸标签,应该以ppic-9k全长基因为模版还是一个片段为模版呢,初学者求指导,谢谢啊:t
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761429495

新虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by xbl3688 at 2012-08-18 19:01:31
ppic-9k应该是酵母的内源质粒吧,像四楼说的,你扩增的时候在上游引物里加上组氨酸标签的序列,克隆出基因后双酶切,连接到这个质粒上就可以了啊。你扩这个质粒上的基因或是片段干嘛呢

引物        长度(bp)        序列(5’→3’)
Xyn-1         25              ATGGTTGCCTTTACTTCCCTTCTCG
Xyn-2        25              TAGCTGACAGTGATGGAAGCAGAGC
亲,我想问一下我给这个上游引物加6个组氨酸标签序列的话,是不是变为
CATCATCATCATCATCATATGGTTGCCTTTACTTCCCTTCTCG组氨酸不是有两个密码子吗,该如何选择呢?
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11楼2012-08-20 13:52:31
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哈哈大姑爷

至尊木虫 (知名作家)

感谢参与,应助指数 +1
scelab: 应助指数-1, 酱油的 2012-08-17 12:14:35
路过,看看有没有酱油
GO ON
2楼2012-08-16 22:55:19
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761429495

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 哈哈大姑爷 at 2012-08-16 22:55:19
路过,看看有没有酱油

有没有建设性的意见啊
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3楼2012-08-17 13:37:44
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chlorella409

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你可以在目的基因的一端引物中加上His的编码,重新PCR后和载体片段连接

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

4楼2012-08-17 16:03:09
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