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[求助]
蛋白纯化
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求助:木聚糖酶已经在毕赤酵母中表达了，接下来想做酶蛋白纯化，我打算通过PCR重新构建质粒给目的基因加上组氨酸标签，应该以ppic-9k全长基因为模版还是一个片段为模版呢，初学者求指导，谢谢啊 :t |
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yandz680717
木虫 (正式写手)
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- 散金: 100
- 红花: 3
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- 在线: 345.4小时
- 虫号: 1160259
- 注册: 2010-12-01
- 性别: GG
- 专业: 环境微生物学
10楼2012-08-20 05:55:15
yandz680717
木虫 (正式写手)
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【答案】应助回帖
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建议histag加在C端，或者两种 C端，N端都考虑。 根据毕氏酵母密码子偏好以及不能出现连续的A，U. 加 CAT CAT CAT CAT CAT CAT 可以。要克隆到pPIC9K上，你还得加上酶切位点，才能克隆到载体上，注意跟信号肽读码框要融合 你可以看看pPICZa载体说明，把PDF下下来自己看看，就知道了，http://products.invitrogen.com/ivgn/product/V20520 上面都有说明的，它的histag好像是加在C端.此设计引物时在下游引物上加入Xa因子或肠激酶酶切位点+histag+终止密码子 |
13楼2012-08-21 07:01:43