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761429495

新虫 (小有名气)

[求助] 蛋白纯化

求助:木聚糖酶已经在毕赤酵母中表达了,接下来想做酶蛋白纯化,我打算通过PCR重新构建质粒给目的基因加上组氨酸标签,应该以ppic-9k全长基因为模版还是一个片段为模版呢,初学者求指导,谢谢啊:t
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每一个让你讨厌的现在,都有一个不努力的曾经。
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xbl3688

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
ppic-9k应该是酵母的内源质粒吧,像四楼说的,你扩增的时候在上游引物里加上组氨酸标签的序列,克隆出基因后双酶切,连接到这个质粒上就可以了啊。你扩这个质粒上的基因或是片段干嘛呢

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生活的乐趣在于善于发现美,学会欣赏美
6楼2012-08-18 19:01:31
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xbl3688

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
12楼: Originally posted by 761429495 at 2012-08-20 14:22:59
引物        长度(bp)        序列(5’→3’)
Xyn-1         25              ATGGTTGCCTTTACTTCCCTTCTCG
Xyn-2        25              TAGCTGACAGTGATGGAAGCAGAGC
亲,我想问一下我给这个上游引物加6个组 ...

你在引物里加酶切位点了吗? 六个组氨酸要放在酶切位点后面,引物稍微有点长。
生活的乐趣在于善于发现美,学会欣赏美
14楼2012-08-21 14:43:31
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