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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 天然药物化学 » 国产替代反相相关分离问题
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yk3782

木虫 (正式写手)

[求助] 国产替代反相相关分离问题

本人现在做一极性较大的样品纯化，遇到如下问题
大孔树脂基本已经成熟，将样品可以纯化至70-80，在之后的纯化过程中，遇到了许多问题，先是用重结晶方法浪费了近20天时间，最终还是以失败告终，几经折腾，现在用反相硅胶做最后一步纯化工作。
国产反相替代硅胶，分F（亲脂）型和R（亲水）型，均为30-50的粒径，我是用的过程如下：
装柱：称取F型树脂10 g，用甲醇处理后装柱，柱子规格（2cm*30cm），然后梯度冲柱至水，用水冲洗一定柱体积后准备上样，水面高出填料面约5 cm；
上样方法：将1 g样品用甲醇溶解，取少量反相硅胶于蒸发皿中，将样品加入，拌匀，挥干，上样。
洗脱：分别用250ml的水洗脱，流分分50,100,100,来接；其次分别用10%，20%，25%，30%，35,40%，50%，60%，70%，80%，90%，100%的甲醇冲300 ml,每份接100 ml。
点板验证：用聚酰胺薄膜点板验证结果
聚酰胺薄膜上点为依次为：标 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 标 23 24 25 26 27 28 ……最后一个点也是标准品。789（水），10 11 12（10%甲醇），13 14 15（20%甲醇）16 17 18（25甲醇）19 20 21（30甲醇）22 23 24（35甲醇）25 26 27（40甲醇），后面以此类推。
含量测定：原样品当时测的时候是78.24%，将9,12,15,17,20,23,27 7份样品进行含量测定，其中9号为80.13%（浸膏量0.1884g），12号为79.30（浸膏量0.2822 g），15号为61.35%（浸膏量0.1813 g）,17 号为47.31%（浸膏量为0.1214 g），20号为17%（浸膏量0.0816 g），23号为17.6（浸膏量0.0734），27号含量为0（浸膏量0.0546）。这个结果令我很崩溃，我不知该怎么做了，求高手指点。
R型反相：由于洗脱的时候特别慢，还是在加压的情况下，简直无法接受，没有做下去。
急切想知道我给如何做我下一步。最起码应该达到90%才行啊。
若能解决此问题，金币一定奉上。

聚酰胺色谱检测结果
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酸甜苦辣都是营养，成功失败都是经验。
1楼 2012-08-14 02:00:47
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

housexpf99

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
yk3782: 金币+10, ★有帮助, 你好，我的东西是苯乙醇苷类 2012-08-14 22:36:53
xiaoxiao270: 金币+1, 3Q 2012-08-14 23:50:12
第一：你大体确定你要拿的化合物是属于哪一类的？
第二：走的反相柱子，为什么不用反相薄层而用聚酰胺薄膜？从你的聚酰胺薄膜来看，没什么分离效果，那些个点都可以合并。
第三：100ml一接有点儿多，50ml好一些
第四：建议你合并后，选择个好的展开系统，在反相制备板上展开，然后刮板纯化，这样纯度肯定能90%以上，不过这样可能量小些，不过也能做普了。
第五：反相柱本来就很慢，急不得，加压走很正常
希望对你有帮助~~~~~~
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不喜欢搞科研，还是难逃魔掌
4楼2012-08-14 15:58:46
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普通回帖

匿名

用户注销 (职业作家)
★
感谢参与，应助指数 +1
yk3782: 金币+1, 期待中 2012-08-14 09:13:01
豆哥: 应助指数-1, 如不能提供相关信息，请不要点应助。请在有能力回答的时候应助。谢谢。 2012-08-14 14:25:52
本帖仅楼主可见
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2楼2012-08-14 08:08:34
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yk3782

木虫 (正式写手)
真诚求指点
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酸甜苦辣都是营养，成功失败都是经验。
3楼2012-08-14 13:49:32
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lizhenlin

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
yk3782: 金币+3, ★有帮助, 感觉像是个高手，是酚酸类的，牵扯到后面的一条链，凝胶的成本比较高，不是很适合。不知还有没有什么建议 2012-08-14 22:53:47
xiaoxiao270: 金币+1, 3Q 2012-08-14 23:50:18
看你的目标产物有点像是酚酸类或者黄酮类的成分，何不用凝胶试试看，好像sephadex LH-20 对这类成分分离效果还不错。
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没有人会记得你三天前做过什么的
5楼2012-08-14 22:21:20
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yk3782

木虫 (正式写手)
★
xiaoxiao270: 金币+1, 3Q 2012-08-14 23:50:24
引用回帖:
4楼: Originally posted by housexpf99 at 2012-08-14 15:58:46
第一：你大体确定你要拿的化合物是属于哪一类的？
第二：走的反相柱子，为什么不用反相薄层而用聚酰胺薄膜？从你的聚酰胺薄膜来看，没什么分离效果，那些个点都可以合并。
第三：100ml一接有点儿多，50ml好一些
...

一、苯乙醇苷类，极性大，水中及甲醇中溶解性较大；
二、聚酰胺板是以前做过的同学摸索的（参考文献）；
三、换成50ml，可以试试；
四、反相制备板不现实，因为我不是只要打谱的那么一点，需要摸索一个固定的条件，可以在后期做时多拿点样品；
五、反相柱在跑的过程中，为什么在加压的情况下F型（亲脂型）流速挺快，而R型（亲水型）流速非常的慢。
六、不知有没有人用过这种国产替代反相的，现在有些怀疑这种反相材料是不是有问题
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酸甜苦辣都是营养，成功失败都是经验。
6楼2012-08-14 22:49:45
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mlanqiang

木虫之王 (文学泰斗)

蓝博士

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
yk3782: 金币+1, 谢谢，非常希望你会有有新的建议 2012-08-16 00:20:33
可以用凝胶试试看分离效果。
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蓝精灵
7楼2012-08-15 06:35:49
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lizhenlin

木虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by lizhenlin at 2012-08-14 22:21:20
看你的目标产物有点像是酚酸类或者黄酮类的成分，何不用凝胶试试看，好像sephadex LH-20 对这类成分分离效果还不错。

高手谈不上哈。你分的是苯乙醇苷类，按理说反相是可以分离出来的，不行的话你可以考虑是不是你的洗脱条件没摸好，建议用反相板摸好条件再洗脱；如果条件也合适，那可能还真是反相填料有问题。
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没有人会记得你三天前做过什么的
8楼2012-08-15 09:02:04
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housexpf99

铁虫 (初入文坛)
你还是检查下填料吧，理论讲分离苯乙醇苷类化合物反相应该可以，纯化时候上个凝胶。
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不喜欢搞科研，还是难逃魔掌
9楼2012-08-15 10:34:00
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yk3782

木虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by lizhenlin at 2012-08-15 09:02:04
高手谈不上哈。你分的是苯乙醇苷类，按理说反相是可以分离出来的，不行的话你可以考虑是不是你的洗脱条件没摸好，建议用反相板摸好条件再洗脱；如果条件也合适，那可能还真是反相填料有问题。...

咨询了一下卖这个材料的老板，他说填料没问题，他们使用时是这样的，举例：5cm*100cm的玻璃柱子，填料要装50-70cm。我今天用硅胶板摸了一个条件，跑标准品时效果挺好，跑的很慢，跑样品时，不是很好。
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酸甜苦辣都是营养，成功失败都是经验。
10楼2012-08-16 00:18:05
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