| 查看: 1147 | 回复: 10 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
yk3782木虫 (正式写手)
|
[求助]
国产替代反相相关分离问题
|
|
|
本人现在做一极性较大的样品纯化，遇到如下问题 大孔树脂基本已经成熟，将样品可以纯化至70-80，在之后的纯化过程中，遇到了许多问题，先是用重结晶方法浪费了近20天时间，最终还是以失败告终，几经折腾，现在用反相硅胶做最后一步纯化工作。 国产反相替代硅胶，分F（亲脂）型和R（亲水）型，均为30-50的粒径，我是用的过程如下： 装柱：称取F型树脂10 g，用甲醇处理后装柱，柱子规格（2cm*30cm），然后梯度冲柱至水，用水冲洗一定柱体积后准备上样，水面高出填料面约5 cm； 上样方法：将1 g样品用甲醇溶解，取少量反相硅胶于蒸发皿中，将样品加入，拌匀，挥干，上样。 洗脱：分别用250ml的水洗脱，流分分50,100,100,来接；其次分别用10%，20%，25%，30%，35,40%，50%，60%，70%，80%，90%，100%的甲醇冲300 ml,每份接100 ml。 点板验证：用聚酰胺薄膜点板验证结果 聚酰胺薄膜上点为依次为：标 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 标 23 24 25 26 27 28 ……最后一个点也是标准品。789（水），10 11 12（10%甲醇），13 14 15（20%甲醇）16 17 18（25甲醇）19 20 21（30甲醇）22 23 24（35甲醇）25 26 27（40甲醇），后面以此类推。 含量测定：原样品当时测的时候是78.24%，将9,12,15,17,20,23,27 7份样品进行含量测定，其中9号为80.13%（浸膏量0.1884g），12号为79.30（浸膏量0.2822 g），15号为61.35%（浸膏量0.1813 g）,17 号为47.31%（浸膏量为0.1214 g），20号为17%（浸膏量0.0816 g），23号为17.6（浸膏量0.0734），27号含量为0（浸膏量0.0546）。这个结果令我很崩溃，我不知该怎么做了，求高手指点。 R型反相：由于洗脱的时候特别慢，还是在加压的情况下，简直无法接受，没有做下去。 急切想知道我给如何做我下一步。最起码应该达到90%才行啊。 若能解决此问题，金币一定奉上。  聚酰胺色谱检测结果 |
回复此楼» 猜你喜欢
297求调剂
已经有16人回复
-
326分，一志愿沪9，求生物学调剂
已经有4人回复
-
288求调剂，一志愿华南理工大学071005
已经有3人回复
-
304求调剂
已经有13人回复
-
调剂
已经有18人回复
-
293调剂
已经有4人回复
-
338求调剂
已经有7人回复
-
263求调剂
已经有3人回复
-
求调剂
已经有15人回复
-
机械工程264学硕求调剂
已经有3人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 请教用过反相硅胶柱分离的高手
已经有14人回复
- 关于正相的液相图与反相液相色谱图对应的问题
已经有5人回复
- 反相C18柱分离多巴胺，柱子用一段时间后出现分离峰，怎么解决
已经有12人回复
- 反相C18柱分离多巴胺，柱子用一段时间后柱压很大，怎么解决
已经有20人回复
- 反相微乳液法包硅时出现的问题···求解答！！！
已经有13人回复
- 【求助】反相C18层析柱怎样装柱，使用的问题
已经有8人回复
- 【求助】ODS反相硅胶柱分离苯乙醇苷类物质怎么分啊？
已经有10人回复
- 【求助】反相乳液聚合中的问题！
已经有10人回复
- 【求助】反相悬浮聚合遇到问题
已经有17人回复
- 【求助】HPLC分离小极性物质，用正相柱还是反相柱？
已经有19人回复
- 【求助/交流】反相HPLC分离蛋白质
已经有5人回复
- 【资源】转：反相制备型高效液相色谱法分离纯化过程中的共性问题
已经有36人回复
mlanqiang
木虫之王 (文学泰斗)
蓝博士
- 应助: 3409 (副教授)
- 金币: 55278.8
- 散金: 5498
- 红花: 62
- 帖子: 73916
- 在线: 730.8小时
- 虫号: 302202
- 注册: 2006-12-02
- 性别: GG
- 专业: 胶体与界面化学
7楼2012-08-15 06:35:49
★
感谢参与，应助指数 +1
yk3782: 金币+1, 期待中 2012-08-14 09:13:01
豆哥: 应助指数-1, 如不能提供相关信息，请不要点应助。请在有能力回答的时候应助。谢谢。 2012-08-14 14:25:52
感谢参与，应助指数 +1
yk3782: 金币+1, 期待中 2012-08-14 09:13:01
豆哥: 应助指数-1, 如不能提供相关信息，请不要点应助。请在有能力回答的时候应助。谢谢。 2012-08-14 14:25:52
 本帖仅楼主可见 |
2楼2012-08-14 08:08:34
housexpf99
铁虫 (初入文坛)
- 应助: 4 (幼儿园)
- 金币: 64.8
- 帖子: 21
- 在线: 5.1小时
- 虫号: 1907679
- 注册: 2012-07-24
- 性别: MM
- 专业: 天然药物化学
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
yk3782: 金币+10, ★有帮助, 你好，我的东西是苯乙醇苷类 2012-08-14 22:36:53
xiaoxiao270: 金币+1, 3Q 2012-08-14 23:50:12
感谢参与，应助指数 +1
yk3782: 金币+10, ★有帮助, 你好，我的东西是苯乙醇苷类 2012-08-14 22:36:53
xiaoxiao270: 金币+1, 3Q 2012-08-14 23:50:12
|
第一：你大体确定你要拿的化合物是属于哪一类的？ 第二：走的反相柱子，为什么不用反相薄层而用聚酰胺薄膜？从你的聚酰胺薄膜来看，没什么分离效果，那些个点都可以合并。 第三：100ml一接有点儿多，50ml好一些 第四：建议你合并后，选择个好的展开系统，在反相制备板上展开，然后刮板纯化，这样纯度肯定能90%以上，不过这样可能量小些，不过也能做普了。 第五：反相柱本来就很慢，急不得，加压走很正常 希望对你有帮助~~~~~~ |
4楼2012-08-14 15:58:46
5楼2012-08-14 22:21:20
