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yk3782木虫 (正式写手)
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[求助]
国产替代反相相关分离问题
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本人现在做一极性较大的样品纯化，遇到如下问题 大孔树脂基本已经成熟，将样品可以纯化至70-80，在之后的纯化过程中，遇到了许多问题，先是用重结晶方法浪费了近20天时间，最终还是以失败告终，几经折腾，现在用反相硅胶做最后一步纯化工作。 国产反相替代硅胶，分F（亲脂）型和R（亲水）型，均为30-50的粒径，我是用的过程如下： 装柱：称取F型树脂10 g，用甲醇处理后装柱，柱子规格（2cm*30cm），然后梯度冲柱至水，用水冲洗一定柱体积后准备上样，水面高出填料面约5 cm； 上样方法：将1 g样品用甲醇溶解，取少量反相硅胶于蒸发皿中，将样品加入，拌匀，挥干，上样。 洗脱：分别用250ml的水洗脱，流分分50,100,100,来接；其次分别用10%，20%，25%，30%，35,40%，50%，60%，70%，80%，90%，100%的甲醇冲300 ml,每份接100 ml。 点板验证：用聚酰胺薄膜点板验证结果 聚酰胺薄膜上点为依次为：标 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 标 23 24 25 26 27 28 ……最后一个点也是标准品。789（水），10 11 12（10%甲醇），13 14 15（20%甲醇）16 17 18（25甲醇）19 20 21（30甲醇）22 23 24（35甲醇）25 26 27（40甲醇），后面以此类推。 含量测定：原样品当时测的时候是78.24%，将9,12,15,17,20,23,27 7份样品进行含量测定，其中9号为80.13%（浸膏量0.1884g），12号为79.30（浸膏量0.2822 g），15号为61.35%（浸膏量0.1813 g）,17 号为47.31%（浸膏量为0.1214 g），20号为17%（浸膏量0.0816 g），23号为17.6（浸膏量0.0734），27号含量为0（浸膏量0.0546）。这个结果令我很崩溃，我不知该怎么做了，求高手指点。 R型反相：由于洗脱的时候特别慢，还是在加压的情况下，简直无法接受，没有做下去。 急切想知道我给如何做我下一步。最起码应该达到90%才行啊。 若能解决此问题，金币一定奉上。  聚酰胺色谱检测结果 |
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housexpf99
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9楼2012-08-15 10:34:00
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2楼2012-08-14 08:08:34
housexpf99
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【答案】应助回帖
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第一：你大体确定你要拿的化合物是属于哪一类的？ 第二：走的反相柱子，为什么不用反相薄层而用聚酰胺薄膜？从你的聚酰胺薄膜来看，没什么分离效果，那些个点都可以合并。 第三：100ml一接有点儿多，50ml好一些 第四：建议你合并后，选择个好的展开系统，在反相制备板上展开，然后刮板纯化，这样纯度肯定能90%以上，不过这样可能量小些，不过也能做普了。 第五：反相柱本来就很慢，急不得，加压走很正常 希望对你有帮助~~~~~~ |
4楼2012-08-14 15:58:46
5楼2012-08-14 22:21:20
