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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 酶切位点不同，构建载体
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鱼卡潘

铜虫 (初入文坛)

[求助] 酶切位点不同，构建载体

最近构建一个载体，由于载体和片段酶切位点不同，对载体和片段进行了平末端处理，然后进行平末端连接，始终连接不上，请问大家有什么建议，对于构建酶切位点不同的载体？不甚感激！
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1楼 2012-08-04 21:49:09
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mydoves

木虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by mydoves at 2012-08-05 15:49:06
可以把片段里与载体相同的酶切位点突变掉，再连接比较好。

就是设计引物两对引物，引物上包含要突变的位点，但不能改变原序列的氨基酸，通过2轮PCR就能得到突变后的序列。
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7楼2012-08-06 13:03:20
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酶切专家

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-08-05 22:05:51
你的实验中是双酶切还是单酶切？
如果你能给出更详细的信息（比如酶切位点等），大家可能更容易给你一些建议。
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鱼卡潘
2楼2012-08-04 22:15:59
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mydoves

木虫 (小有名气)
可以把片段里与载体相同的酶切位点突变掉，再连接比较好。
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鱼卡潘
3楼2012-08-05 15:49:06
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鱼卡潘

铜虫 (初入文坛)
送鲜花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by 酶切专家 at 2012-08-04 22:15:59
你的实验中是双酶切还是单酶切？
如果你能给出更详细的信息（比如酶切位点等），大家可能更容易给你一些建议。

其中载体是per8，单酶切（xholⅠ），片端是双酶切（xbalⅠ, kpnⅠ）
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4楼2012-08-05 19:01:32
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