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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 感受态细胞转化，50ul感受态细胞+50ulDNA，能成功吗？
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jackiey2

铜虫 (正式写手)

[求助] 感受态细胞转化，50ul感受态细胞+50ulDNA，能成功吗？

做大肠杆菌感受态转化，买回来的包装好的100ul/管感受态细胞，安照说明书上的从-70℃取出放冰上融化后分两管，但说明书上没说加多少DNA，忘了问前辈改加多少了（前辈后来特别重申是5ul），一时糊涂把切胶得来的50ulDNA全加进去了（挨骂）。请问，结果会怎么样？
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遗传
1楼 2012-07-27 15:47:57
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thunder00

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
加太多了，先转化再说吧
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2楼2012-07-27 15:51:00
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gelois

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
jackiey2: 金币+1, ★有帮助, 谢谢了，是10%，我记住了。 2012-07-27 16:34:38
DNA加太多了，一般是不能超过体系的10%的，超过了转化效率会很低，像你这样加了这么多估计就危险了。
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3楼2012-07-27 16:03:33
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chlorella409

木虫 (正式写手)
感受态撑死了
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4楼2012-07-27 16:08:39
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jackiey2

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by gelois at 2012-07-27 16:03:33
DNA加太多了，一般是不能超过体系的10%的，超过了转化效率会很低，像你这样加了这么多估计就危险了。

我把转化后的共100ul的细胞加了600ul的LB，培养1小时后加抗生素，也就是共700ul左右，再从中取100ul铺平板，长的都连成片了。
从一开始的100ul细胞了取了10ul，重新加入50ul活化细胞，再转化，铺板，还是连成一片，边缘出现单菌落。
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遗传
5楼2012-07-27 16:43:48
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jackiey2

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by gelois at 2012-07-27 16:03:33
DNA加太多了，一般是不能超过体系的10%的，超过了转化效率会很低，像你这样加了这么多估计就危险了。

我把转化后的共100ul的细胞加了600ul的LB，培养1小时后加抗生素，也就是共700ul左右，再从中取100ul铺平板，长的都连成片了。
从一开始的100ul细胞了取了10ul，重新加入50ul活化细胞，再转化，铺板，还是连成一片，边缘出现单菌落。
如果说转化效率低，会出现这种情况吗？刚接触这块，很多不懂望指教。另外，请问朋友有没有相关方面的资料或书籍给推荐下。
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遗传
6楼2012-07-27 16:59:28
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liuyu_sdili

木虫 (正式写手)
你j加到感受态里面的是切胶回收的DNA片段吗?有没有做连接？
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7楼2012-07-28 21:18:53
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xiongyaoling

金虫 (小有名气)
加太多了，感受态饱合了
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8楼2012-07-29 11:26:27
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jackiey2

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by liuyu_sdili at 2012-07-28 21:18:53
你j加到感受态里面的是切胶回收的DNA片段吗?有没有做连接？

是已经构建好了的重组质粒，进行PCR后的产物加进感受态
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遗传
9楼2012-07-29 12:15:32
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觊觎天堂

银虫 (初入文坛)
20ul的感受态细胞，若是连接产物加2ul，若直接是重组质粒加1ul就可以了
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10楼2012-07-30 02:54:20
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