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jackiey2

铜虫 (正式写手)

[求助] 感受态细胞转化,50ul感受态细胞+50ulDNA,能成功吗?

做大肠杆菌感受态转化,买回来的包装好的100ul/管感受态细胞,安照说明书上的从-70℃取出放冰上融化后分两管,但说明书上没说加多少DNA,忘了问前辈改加多少了(前辈后来特别重申是5ul),一时糊涂把切胶得来的50ulDNA全加进去了(挨骂)。请问,结果会怎么样?
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遗传
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jackiey2

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by gelois at 2012-07-27 16:03:33
DNA加太多了,一般是不能超过体系的10%的,超过了转化效率会很低,像你这样加了这么多估计就危险了。

我把转化后的共100ul的细胞加了600ul的LB,培养1小时后加抗生素,也就是共700ul左右,再从中取100ul铺平板,长的都连成片了。
从一开始的100ul细胞了取了10ul,重新加入50ul活化细胞,再转化,铺板,还是连成一片,边缘出现单菌落。
遗传
5楼2012-07-27 16:43:48
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thunder00

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
加太多了,先转化再说吧
2楼2012-07-27 15:51:00
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gelois

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
jackiey2: 金币+1, 有帮助, 谢谢了,是10%,我记住了。 2012-07-27 16:34:38
DNA加太多了,一般是不能超过体系的10%的,超过了转化效率会很低,像你这样加了这么多估计就危险了。
3楼2012-07-27 16:03:33
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chlorella409

木虫 (正式写手)

感受态撑死了
4楼2012-07-27 16:08:39
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