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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 感受态细胞转化，50ul感受态细胞+50ulDNA，能成功吗？
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jackiey2

铜虫 (正式写手)

[求助] 感受态细胞转化，50ul感受态细胞+50ulDNA，能成功吗？

做大肠杆菌感受态转化，买回来的包装好的100ul/管感受态细胞，安照说明书上的从-70℃取出放冰上融化后分两管，但说明书上没说加多少DNA，忘了问前辈改加多少了（前辈后来特别重申是5ul），一时糊涂把切胶得来的50ulDNA全加进去了（挨骂）。请问，结果会怎么样？
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遗传
1楼 2012-07-27 15:47:57
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jackiey2

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by gelois at 2012-07-27 16:03:33
DNA加太多了，一般是不能超过体系的10%的，超过了转化效率会很低，像你这样加了这么多估计就危险了。

我把转化后的共100ul的细胞加了600ul的LB，培养1小时后加抗生素，也就是共700ul左右，再从中取100ul铺平板，长的都连成片了。
从一开始的100ul细胞了取了10ul，重新加入50ul活化细胞，再转化，铺板，还是连成一片，边缘出现单菌落。
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遗传
5楼2012-07-27 16:43:48
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jackiey2

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by gelois at 2012-07-27 16:03:33
DNA加太多了，一般是不能超过体系的10%的，超过了转化效率会很低，像你这样加了这么多估计就危险了。

我把转化后的共100ul的细胞加了600ul的LB，培养1小时后加抗生素，也就是共700ul左右，再从中取100ul铺平板，长的都连成片了。
从一开始的100ul细胞了取了10ul，重新加入50ul活化细胞，再转化，铺板，还是连成一片，边缘出现单菌落。
如果说转化效率低，会出现这种情况吗？刚接触这块，很多不懂望指教。另外，请问朋友有没有相关方面的资料或书籍给推荐下。
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遗传
6楼2012-07-27 16:59:28
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jackiey2

铜虫 (正式写手)
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7楼: Originally posted by liuyu_sdili at 2012-07-28 21:18:53
你j加到感受态里面的是切胶回收的DNA片段吗?有没有做连接？

是已经构建好了的重组质粒，进行PCR后的产物加进感受态
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遗传
9楼2012-07-29 12:15:32
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jackiey2

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
12楼: Originally posted by damaomao at 2012-07-30 08:36:37
你固体培养基里加抗生素了吗

加了的，质粒带有氨苄抗性。
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遗传
13楼2012-07-30 08:51:19
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jackiey2

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
19楼: Originally posted by wjswj at 2012-07-30 15:30:13
建议先看书，看资料。我觉得楼主还没有理解什么是转化，转化目的是什么。《分子克隆》必看。不要看别人怎么做就跟着做。PCR产物干嘛要加在感受态细胞里？还是先学基础知识在做实验吧，理解之后就知道该干什么了。

嗯，我是新手，在补基础知识呢。不管怎么样，这次的实验已经成功了，呵呵。烦请前辈，还有些什么书给小虫我推荐下吧，不胜感激！
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遗传
21楼2012-08-03 15:40:01
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