感受态细胞转化，50ul感受态细胞+50ulDNA，能成功吗？ - 分子生物 - 综合其他

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觊觎天堂

银虫 (初入文坛)

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20ul的感受态细胞，若是连接产物加2ul，若直接是重组质粒加1ul就可以了

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11楼2012-07-30 03:11:59

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damaomao

禁虫 (正式写手)

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12楼2012-07-30 08:36:37

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jackiey2

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12楼: Originally posted by damaomao at 2012-07-30 08:36:37
你固体培养基里加抗生素了吗

加了的，质粒带有氨苄抗性。

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遗传

13楼2012-07-30 08:51:19

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gelois

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6楼: Originally posted by jackiey2 at 2012-07-27 16:59:28
我把转化后的共100ul的细胞加了600ul的LB，培养1小时后加抗生素，也就是共700ul左右，再从中取100ul铺平板，长的都连成片了。
从一开始的100ul细胞了取了10ul，重新加入50ul活化细胞，再转化，铺板，还是连成一片 ...

其实这其中的原因我还真心不是很清楚。
看你的描述应该是长得太多了，你应该取1ul稀释到100ul，再取1ul稀释至100，这样稀释大概4、5次，然后取10~20ul去涂平板，应该就不会有连成一片的情况了。
然后我看了看我手头的东西，还真没有关于转化的资料，不好意思啊。

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14楼2012-07-30 08:56:05

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gelois

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13楼: Originally posted by jackiey2 at 2012-07-30 08:51:19
加了的，质粒带有氨苄抗性。...

又帮你去问了下。
每个感受态细胞所能转入的质粒数目是有限的，所以你加的太多的话，质粒也不会全部转入，这样就浪费了。而你加的太多的话，感受态细胞有可能就会因为体系渗透压和离子浓度的变化而被撑破从而影响其转化效率。
不过你这感受态转化效率还是挺好的。

最后给你一个建议。下次做转化的时候，一般重组质粒只需加0.5或者1ul就已经绰绰有余了。如果你是做共转化的话，那么切记不要超过其体系的10%。

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15楼2012-07-30 09:22:48

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