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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 感受态细胞转化，50ul感受态细胞+50ulDNA，能成功吗？
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觊觎天堂

银虫 (初入文坛)
20ul的感受态细胞，若是连接产物加2ul，若直接是重组质粒加1ul就可以了
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11楼2012-07-30 03:11:59
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damaomao

禁虫 (正式写手)
本帖内容被屏蔽
12楼2012-07-30 08:36:37
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jackiey2

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
12楼: Originally posted by damaomao at 2012-07-30 08:36:37
你固体培养基里加抗生素了吗

加了的，质粒带有氨苄抗性。
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遗传
13楼2012-07-30 08:51:19
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gelois

金虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by jackiey2 at 2012-07-27 16:59:28
我把转化后的共100ul的细胞加了600ul的LB，培养1小时后加抗生素，也就是共700ul左右，再从中取100ul铺平板，长的都连成片了。
从一开始的100ul细胞了取了10ul，重新加入50ul活化细胞，再转化，铺板，还是连成一片 ...

其实这其中的原因我还真心不是很清楚。
看你的描述应该是长得太多了，你应该取1ul稀释到100ul，再取1ul稀释至100，这样稀释大概4、5次，然后取10~20ul去涂平板，应该就不会有连成一片的情况了。
然后我看了看我手头的东西，还真没有关于转化的资料，不好意思啊。
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14楼2012-07-30 08:56:05
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gelois

金虫 (正式写手)
引用回帖:
13楼: Originally posted by jackiey2 at 2012-07-30 08:51:19
加了的，质粒带有氨苄抗性。...

又帮你去问了下。
每个感受态细胞所能转入的质粒数目是有限的，所以你加的太多的话，质粒也不会全部转入，这样就浪费了。而你加的太多的话，感受态细胞有可能就会因为体系渗透压和离子浓度的变化 而被撑破从而影响其转化效率。
不过你这感受态转化效率还是挺好的。

最后给你一个建议。下次做转化的时候，一般重组质粒只需加0.5或者1ul就已经绰绰有余了。如果你是做共转化的话，那么切记不要超过其体系的10%。
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15楼2012-07-30 09:22:48
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damaomao

禁虫 (正式写手)
本帖内容被屏蔽
16楼2012-07-30 10:07:00
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匿名

用户注销 (正式写手)
本帖仅楼主可见
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17楼2012-07-30 11:01:13
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zc10052157

新虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by jackiey2 at 2012-07-29 12:15:32
是已经构建好了的重组质粒，进行PCR后的产物加进感受态...

如果你的表述和我的理解都木有问题的话   你是直接把PCR的片段转化了吧   这样做是什么目的？ 连接后的质粒转化是不可能出现长成一片的情况的  你的平板可能抗生素有问题
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hold住
18楼2012-07-30 11:26:45
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wjswj

木虫 (正式写手)

小木虫领金币专业户
建议先看书，看资料。我觉得楼主还没有理解什么是转化，转化目的是什么。《分子克隆》必看。不要看别人怎么做就跟着做。PCR产物干嘛要加在感受态细胞里？还是先学基础知识在做实验吧，理解之后就知道该干什么了。
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金币是赌出来的
19楼2012-07-30 15:30:13
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夏尔list

金虫 (著名写手)
同楼上！“是已经构建好了的重组质粒，进行PCR后的产物加进感受态”
这句话究竟是质粒还是PCR产物加入感受态？PCR产物加入感受态有什么意义么
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20楼2012-08-02 20:21:08
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