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jackiey2

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[求助] 感受态细胞转化，50ul感受态细胞+50ulDNA，能成功吗？

做大肠杆菌感受态转化，买回来的包装好的100ul/管感受态细胞，安照说明书上的从-70℃取出放冰上融化后分两管，但说明书上没说加多少DNA，忘了问前辈改加多少了（前辈后来特别重申是5ul），一时糊涂把切胶得来的50ulDNA全加进去了（挨骂）。请问，结果会怎么样？

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遗传

1楼 2012-07-27 15:47:57

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gelois

金虫 (正式写手)

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引用回帖:

13楼: Originally posted by jackiey2 at 2012-07-30 08:51:19
加了的，质粒带有氨苄抗性。...

又帮你去问了下。
每个感受态细胞所能转入的质粒数目是有限的，所以你加的太多的话，质粒也不会全部转入，这样就浪费了。而你加的太多的话，感受态细胞有可能就会因为体系渗透压和离子浓度的变化而被撑破从而影响其转化效率。
不过你这感受态转化效率还是挺好的。

最后给你一个建议。下次做转化的时候，一般重组质粒只需加0.5或者1ul就已经绰绰有余了。如果你是做共转化的话，那么切记不要超过其体系的10%。