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木子hwj

银虫 (小有名气)

[求助] 关于液相色谱采用梯度洗脱,物质出峰时间的问题

本人试验采用梯度洗脱,但是出峰时间很奇怪。流动相分别为水与乙腈
梯度条件:0-4min内水从95%降到5%;4-8min内水相从5%恢复到95%。
物质的出峰时间在4.7min出现。
重现性及峰形都很好。
但这个出峰时间是否很奇怪?请各位高手指教。。。。
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努力生活
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木子hwj

银虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 鸭绿江畔 at 2012-07-24 12:08:25
我猜测一下,你通过某种手段,得知你的待测峰,应该出现在0-4min内,但实际发现,每次都在4.7min出峰,你想知道是什么原因造成的?
1. 这是最常见的情况:
    你的色谱柱出口端到进检测器的距离是多少?也就是说 ...

谢谢您的回复与建议呵。
对于梯度洗脱来说,一般样品出峰的时间应该是在有机相比例不断增加的那一段,而不是有机相比例不断减少的那一段吧。。
按照您的建议,有可能是柱子与检测器之间的死体积造成的?
努力生活
4楼2012-07-24 13:06:43
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wddmq

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
xbqewpq: 金币+1, 专家辛苦 ^ ^ 2012-07-24 14:31:00
出峰时间倒是不奇怪,不过这个时间是很容易出梯度峰的,很多情况下都会对测定有一定影响。不过你这个梯度有点赶啊!是不是不用梯度也行啊?
1234
2楼2012-07-24 11:58:06
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鸭绿江畔

铁杆木虫 (著名写手)

牛B

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
xbqewpq: 金币+3, 经典! 2012-07-24 14:31:25
我猜测一下,你通过某种手段,得知你的待测峰,应该出现在0-4min内,但实际发现,每次都在4.7min出峰,你想知道是什么原因造成的?
1. 这是最常见的情况:
    你的色谱柱出口端到进检测器的距离是多少?也就是说这部分的PEEK管长度是多少?要知道,样品在这部分流动也算时间的。文献中,尤其是仪器厂家的文献,都不会提及这部分的长度。因为仪器厂家在做实验时,都会把仪器管路连接最优化,尽量减小死体积,以防止待测成分保留时间过长。
2. 这种情况就不常见了:
    液相的泵出问题了,流动想的比例控制不准了。
    但是我认为你的问题还是第一种情况,如果你就是想重复出文献的结论,尽量减少色谱柱出口到检测器之间的死体积。其实这个大可不必。
    第二种情况吗?就只能请工程师了。自己不要擅自拆泵。
我那么努力,就是为了在更高的层次遇见你!
3楼2012-07-24 12:08:25
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yugijiang

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
xbqewpq: 金币+1, 等度比较好~ 2012-07-24 14:32:24
你这个梯度应该会出很多杂峰,不是很适合定量,估计你用等度也可以洗脱
5楼2012-07-24 13:31:02
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