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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 关于液相色谱采用梯度洗脱，物质出峰时间的问题
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木子hwj

银虫 (小有名气)

[求助] 关于液相色谱采用梯度洗脱，物质出峰时间的问题

本人试验采用梯度洗脱，但是出峰时间很奇怪。流动相分别为水与乙腈
梯度条件：0-4min内水从95%降到5%；4-8min内水相从5%恢复到95%。
物质的出峰时间在4.7min出现。
重现性及峰形都很好。
但这个出峰时间是否很奇怪？请各位高手指教。。。。
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努力生活
1楼2012-07-24 11:46:38
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wddmq

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
xbqewpq: 金币+1, 专家辛苦 ^ ^ 2012-07-24 14:31:00
出峰时间倒是不奇怪，不过这个时间是很容易出梯度峰的，很多情况下都会对测定有一定影响。不过你这个梯度有点赶啊！是不是不用梯度也行啊？
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1234
2楼2012-07-24 11:58:06
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鸭绿江畔

铁杆木虫 (著名写手)

牛B

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
xbqewpq: 金币+3, 经典！ 2012-07-24 14:31:25
我猜测一下，你通过某种手段，得知你的待测峰，应该出现在0-4min内，但实际发现，每次都在4.7min出峰，你想知道是什么原因造成的？
1. 这是最常见的情况：
    你的色谱柱出口端到进检测器的距离是多少？也就是说这部分的PEEK管长度是多少？要知道，样品在这部分流动也算时间的。文献中，尤其是仪器厂家的文献，都不会提及这部分的长度。因为仪器厂家在做实验时，都会把仪器管路连接最优化，尽量减小死体积，以防止待测成分保留时间过长。
2. 这种情况就不常见了：
    液相的泵出问题了，流动想的比例控制不准了。
    但是我认为你的问题还是第一种情况，如果你就是想重复出文献的结论，尽量减少色谱柱出口到检测器之间的死体积。其实这个大可不必。
    第二种情况吗？就只能请工程师了。自己不要擅自拆泵。
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我那么努力，就是为了在更高的层次遇见你！
3楼2012-07-24 12:08:25
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木子hwj

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 鸭绿江畔 at 2012-07-24 12:08:25
我猜测一下，你通过某种手段，得知你的待测峰，应该出现在0-4min内，但实际发现，每次都在4.7min出峰，你想知道是什么原因造成的？
1. 这是最常见的情况：
    你的色谱柱出口端到进检测器的距离是多少？也就是说 ...

谢谢您的回复与建议呵。
对于梯度洗脱来说，一般样品出峰的时间应该是在有机相比例不断增加的那一段，而不是有机相比例不断减少的那一段吧。。
按照您的建议，有可能是柱子与检测器之间的死体积造成的？
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努力生活
4楼2012-07-24 13:06:43
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yugijiang

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
xbqewpq: 金币+1, 等度比较好~ 2012-07-24 14:32:24
你这个梯度应该会出很多杂峰，不是很适合定量，估计你用等度也可以洗脱
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5楼2012-07-24 13:31:02
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木子hwj

银虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by yugijiang at 2012-07-24 13:31:02
你这个梯度应该会出很多杂峰，不是很适合定量，估计你用等度也可以洗脱

为什么会出很多杂峰？求教。。。
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努力生活
6楼2012-07-24 13:48:06
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木子hwj

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 鸭绿江畔 at 2012-07-24 12:08:25
我猜测一下，你通过某种手段，得知你的待测峰，应该出现在0-4min内，但实际发现，每次都在4.7min出峰，你想知道是什么原因造成的？
1. 这是最常见的情况：
    你的色谱柱出口端到进检测器的距离是多少？也就是说 ...

我的色谱柱出口到检测器的距离约有30cm，而流速为0.2ml/min。不知道该怎么计算待测成分走这一段所需的时间。。请您指教！
谢谢了
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努力生活
7楼2012-07-24 13:57:13
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xbqewpq

荣誉版主 (著名写手)

魂兮

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
soundhorizo: 金币+1 2012-07-27 15:51:46
流动相比例改变是有一个缓冲时间的，仪器虽然显示是比例改变了，但是这比例到达色谱柱还要缓冲几分钟。所以有出峰时间不符也正常。
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红颜远，相思苦，几番意，难相付。十年情思百年渡，不斩相思不忍顾！
8楼2012-07-24 14:29:58
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liangchangyu

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

这个是很正常的 现象啊，前面乙腈把样品快冲洗出来，刚好走水溶剂的时候出峰
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不在乎曾经拥有，只在乎天长地久。
9楼2012-07-27 14:56:39
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tristone3812

木虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 木子hwj at 2012-07-24 13:57:13
我的色谱柱出口到检测器的距离约有30cm，而流速为0.2ml/min。不知道该怎么计算待测成分走这一段所需的时间。。请您指教！
谢谢了...

应该还包括前面的体积 比如流动相到比例阀 比例阀到柱子
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10楼2012-07-27 15:32:03
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