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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 大家帮我分析一下质粒电泳图
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tzaixmc

木虫 (正式写手)

[求助] 大家帮我分析一下质粒电泳图 已有1人参与

该质粒我是挑取的做克隆连接转化时的篮斑，就是载体pUCM-T的自连菌株然后培养提取的质粒，pUCM-T大小为2773bp。电泳图从左到右分别是DL5000，质粒，质粒HindⅢ单酶切，DL5000。DL5000从上到下的条带大小分别是5000，3000，2000，1500,1000.....。如果该质粒不是假阴性，为什么单酶切的条带在2700左右，而质粒的线性分子（质粒泳道中间条带）还大于5000呢？
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1楼 2012-07-22 19:49:46
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0008meng

至尊木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
会不会是质粒的纯度不够？
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2楼2012-07-22 20:50:18
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0008meng

至尊木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 0008meng at 2012-07-22 20:50:18
会不会是质粒的纯度不够？

我这方面也不太懂？这个图确实有点怪？
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3楼2012-07-22 20:51:05
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reallpf

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你的电泳图条带都成笑脸了，说明你的电泳液时间太久了。应该更换新的电泳缓冲液了。另外，质粒提得最好的就是出现3条带。我认为你单酶切后是单一条带，而且大小也对应该就是没有问题的。
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4楼2012-07-22 21:04:29
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tiani_tan

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
跑质粒应该用的是超螺旋marker，但你质粒的分子量大小确实不太对。质粒应该比线性的快才对啊。很奇怪
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5楼2012-07-23 12:12:10
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tzaixmc

木虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by tiani_tan at 2012-07-23 12:12:10
跑质粒应该用的是超螺旋marker，但你质粒的分子量大小确实不太对。质粒应该比线性的快才对啊。很奇怪

就是很纳闷，按理来说质粒单酶切应该和质粒三条带的中间一条在同一位置才对啊，高手出来解答一下啊。并且还有一点很奇怪的是质粒单酶切的那条带电泳时间短的时候比3000bp大，但是延长电泳时间就比3000bp小了，就是在2700左右的位置
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6楼2012-07-23 16:05:20
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tiani_tan

金虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by tzaixmc at 2012-07-23 16:05:20
就是很纳闷，按理来说质粒单酶切应该和质粒三条带的中间一条在同一位置才对啊，高手出来解答一下啊。并且还有一点很奇怪的是质粒单酶切的那条带电泳时间短的时候比3000bp大，但是延长电泳时间就比3000bp小了，就是 ...

这幅图上看的结果应该是酶切得片段条带要小于300bp，电泳时间短估计是没有跑开
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7楼2012-07-23 20:32:03
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wuweifeng710

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

个人认为都没回答到点上，会有三条带是因为提取的质粒可能会有三种状态，开环的、线性的、超螺旋的，电泳图上超螺旋跑在最前端、再来是线性、最慢是开环。线性的不能再复制，但可以与参考marker大小，一般超螺旋含量越多提取质量越好，所以第二个样提取质量应该还不错
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8楼2016-01-18 10:06:11
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wuweifeng710

木虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by wuweifeng710 at 2016-01-18 10:06:11
个人认为都没回答到点上，会有三条带是因为提取的质粒可能会有三种状态，开环的、线性的、超螺旋的，电泳图上超螺旋跑在最前端、再来是线性、最慢是开环。线性的不能再复制，但可以与参考marker大小，一般超螺旋含量 ...

不好意思，好像离题了
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9楼2016-01-18 10:09:22
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