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tzaixmc

木虫 (正式写手)

[求助] 大家帮我分析一下质粒电泳图 已有1人参与

该质粒我是挑取的做克隆连接转化时的篮斑,就是载体pUCM-T的自连菌株然后培养提取的质粒,pUCM-T大小为2773bp。电泳图从左到右分别是DL5000,质粒,质粒HindⅢ单酶切,DL5000。DL5000从上到下的条带大小分别是5000,3000,2000,1500,1000.....。如果该质粒不是假阴性,为什么单酶切的条带在2700左右,而质粒的线性分子(质粒泳道中间条带)还大于5000呢?
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wuweifeng710

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

个人认为都没回答到点上,会有三条带是因为提取的质粒可能会有三种状态,开环的、线性的、超螺旋的,电泳图上超螺旋跑在最前端、再来是线性、最慢是开环。线性的不能再复制,但可以与参考marker大小,一般超螺旋含量越多提取质量越好,所以第二个样提取质量应该还不错
8楼2016-01-18 10:06:11
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0008meng

至尊木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
会不会是质粒的纯度不够?
2楼2012-07-22 20:50:18
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0008meng

至尊木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 0008meng at 2012-07-22 20:50:18
会不会是质粒的纯度不够?

我这方面也不太懂?这个图确实有点怪?
3楼2012-07-22 20:51:05
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reallpf

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你的电泳图条带都成笑脸了,说明你的电泳液时间太久了。应该更换新的电泳缓冲液了。另外,质粒提得最好的就是出现3条带。我认为你单酶切后是单一条带,而且大小也对应该就是没有问题的。
4楼2012-07-22 21:04:29
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