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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 重叠延伸PCR第一轮做出来了，但是第二轮P不出来
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飘零的叶子

新虫 (小有名气)

[交流] 重叠延伸PCR第一轮做出来了，但是第二轮P不出来

我现在要做重叠延伸，第一轮PCR的两个片段都P出来了，核酸电泳的位置也是正确的，但是第二轮PCR总是P不出来，跑电泳时在100bp及250bp左右有很亮的条带，但是我的目的片段是在1400bp左右！哪位大侠知道这是什么原因啊？！
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1楼 2012-07-20 13:03:48
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smartest183

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
第二轮时两个片段比例做个梯度吧，你是出现smear还是什么都没有呢？出现smear的话你taq酶和引物的量都要降低一些，什么都没有的话两者稍微多一点。另外你用的Taq酶是什么酶？有的片段pfu可能p不出来，换个保真性不那么好的先试试。LA Taq有可能效果好些。
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28楼2012-09-04 11:29:30
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mitocam

新虫 (正式写手)
★
飘零的叶子(金币+1): 谢谢参与
100bp和250bp的是什么？
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3楼2012-07-21 06:44:45
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飘零的叶子

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by mitocam at 2012-07-21 06:44:45
100bp和250bp的是什么？

不知道啊，可能是引物二聚体吧，我们也很纠结那两条带是什么东西
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4楼2012-07-21 09:16:36
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beer胖

新虫 (小有名气)
★
飘零的叶子(金币+1): 谢谢参与
第一轮两个片段的大小分别多少？
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5楼2012-07-21 09:58:34
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