| 查看: 578 | 回复: 0 | ||
[求助]
关于PCR的太多问题想咨询下
|
|
小妹做V6-V8区的PCR，从引物到酶都换了，现在用天根mix的热启动酶，引物是上海生工合成的986F和1401R，做降落PCR，要以第一次PCR产物为模板再做一次同样的TDPCR终于有了产物，但是二聚体太多太多，条带也很暗有时做不出的，退火温度68-58,58如图1； 后来老师说换个试剂盒试试看，安必胜寄来个试用装，用PowerSoil提取的，也是要做两次PCR才有，而且第一次的产物什么条带都没有，以第一次产物为模板做第二次就出现图2这样，退火温度不同图有这样差异，最后选择58-48，48，会有在500bp附近的条带； 然后现在用UltraClean提取，直接用48度的，也是做两次PCR，第一次无条带，以第一次产物为模板做第二次就出现了今天这样图3，像marker一样的产物，我都快疯掉了！！不知道为什么会这样，以前都是有或者没有这么简单，现在出来那么多非特异不知道怎么搞，恳请大家再指点指点我！！  图3，UltraClean® soil DNA Isolation Kit 试剂盒提取后做PCR结果  图2，PowerSoil® DNA Isolation Kit 试剂盒提取,不同退火温度同模板，最右边48度  图1，申能博彩的环境样品提取试剂盒，退火58度，二聚体特多 |
回复此楼» 猜你喜欢
氢氧化钾活化操作
已经有19人回复
-
散金
已经有68人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有230人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
-
ALK5 高选择性小分子 LY-3200882：可放大合成路线与质控要点解析
已经有0人回复
-
AM630（CAS 164178-33-0）：CB2 选择性配体的实验使用与供应要点
已经有0人回复
-
ADC标杆分子T-DM1全解析：从结构设计到实验室应用的技术要点
已经有0人回复
-
HILIC磁珠研究蛋白组学怎么做？
已经有0人回复
-
His标签蛋白纯化怎么才能快？
已经有0人回复
-
WRN变构抑制剂HRO761：从D1/D2界面锁定到MSI合成致死的工具化合物深度解析
已经有0人回复
-
KRAS G12V(ON) 选择性抑制剂 RMC-5127：从三元复合物机制到科研应用
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
找到一些相关的精华帖子，希望有用哦~
一个关于qPCR标准曲线的问题。谢谢！
已经有12人回复
- 求解释这pcr是啥问题，帮同学问的^_^
已经有29人回复
- 关于融合PCR的问题
已经有14人回复
- 求助！关于RT-PCR的问题！
已经有20人回复
- 想问一下关于rt-qPCR的问题
已经有4人回复
- 请教real time pcr问题，谢谢！
已经有10人回复
- 关于PCR产物与pMD 19Tsimple连接的问题
已经有19人回复
- 【求助/交流】求助一个关于ptc-200 PCR的问题
已经有5人回复
- 【求助/交流】请教个关于inverse PCR的问题
已经有21人回复
- 【求助/交流】关于降落pcr的问题！
已经有4人回复
- 【求助/交流】关于PCR的问题
已经有18人回复
- 【求助/交流】求助!大家帮我看一下我的PCR体系有什么问题没?
已经有22人回复
点击这里搜索更多相关资源科研从小木虫开始，人人为我，我为人人
10