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小果冻524

新虫 (小有名气)

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[求助] 关于PCR的太多问题想咨询下

小妹做V6-V8区的PCR，从引物到酶都换了，现在用天根mix的热启动酶，引物是上海生工合成的986F和1401R，做降落PCR，要以第一次PCR产物为模板再做一次同样的TDPCR终于有了产物，但是二聚体太多太多，条带也很暗有时做不出的，退火温度68-58,58如图1；
后来老师说换个试剂盒试试看，安必胜寄来个试用装，用PowerSoil提取的，也是要做两次PCR才有，而且第一次的产物什么条带都没有，以第一次产物为模板做第二次就出现图2这样，退火温度不同图有这样差异，最后选择58-48，48，会有在500bp附近的条带；
然后现在用UltraClean提取，直接用48度的，也是做两次PCR，第一次无条带，以第一次产物为模板做第二次就出现了今天这样图3，像marker一样的产物，我都快疯掉了！！不知道为什么会这样，以前都是有或者没有这么简单，现在出来那么多非特异不知道怎么搞，恳请大家再指点指点我！！

图3，UltraClean® soil DNA Isolation Kit 试剂盒提取后做PCR结果

图2，PowerSoil® DNA Isolation Kit 试剂盒提取,不同退火温度同模板，最右边48度

图1，申能博彩的环境样品提取试剂盒，退火58度，二聚体特多

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