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reallpf

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
scelab: 金币+9, MicEPI+1, 相当给力!谢谢交流呀!!! 2012-07-15 17:37:15
个人意见:实施难度有点大。污泥中的你所特定的某种酶的量大多较少,那么要达到你能检出的量你得处理多少污泥?
个人建议:
1.取新鲜污泥高速离心,取上清为一份样品。
2.利用常用的离子缓冲液或破壁缓冲液(如磷酸缓冲液)重悬底泥,加入破碎用的小玻璃珠,漩涡振荡处理。一般振荡与冰浴间隔进行,我做的条件是振荡30s,冰浴30s,一共处理30min(可适当调整),为保证酶不失活。振荡处理结束高速离心,取上清为一份样品,底泥为一份样品。
这样共有3份样品,测试结束后你可以直接确定你要的酶在污泥什么成分(淤泥,微生物,水)里面。
处理完样品后最好马上测酶活,因为一旦你的样品改变了环境(与原污泥的环境相比),酶活可能很快的丢失,即使不能马上测也要存于-80度。当然也可以试试SDS-PAGE,不过大概没什么效果,因为污泥里面的成分太过于复杂,跑出来可能也看不清楚。还是测酶活最好。
3楼2012-07-15 17:33:37
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