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datachen

金虫 (小有名气)

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[求助] 酶粗提液如何制取

各位虫友，我想测一下污泥里有没某种酶的存在。。然后我想问一下酶粗提液应该怎么制备呢？望大家指导一下

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1楼 2012-07-14 22:32:52

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

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reallpf

木虫 (正式写手)

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
scelab: 金币+9, MicEPI+1, 相当给力！谢谢交流呀！！！ 2012-07-15 17:37:15

个人意见：实施难度有点大。污泥中的你所特定的某种酶的量大多较少，那么要达到你能检出的量你得处理多少污泥？
个人建议：
1.取新鲜污泥高速离心，取上清为一份样品。
2.利用常用的离子缓冲液或破壁缓冲液（如磷酸缓冲液）重悬底泥，加入破碎用的小玻璃珠，漩涡振荡处理。一般振荡与冰浴间隔进行，我做的条件是振荡30s，冰浴30s，一共处理30min（可适当调整），为保证酶不失活。振荡处理结束高速离心，取上清为一份样品，底泥为一份样品。
这样共有3份样品，测试结束后你可以直接确定你要的酶在污泥什么成分（淤泥，微生物，水）里面。
处理完样品后最好马上测酶活，因为一旦你的样品改变了环境（与原污泥的环境相比），酶活可能很快的丢失，即使不能马上测也要存于-80度。当然也可以试试SDS-PAGE，不过大概没什么效果，因为污泥里面的成分太过于复杂，跑出来可能也看不清楚。还是测酶活最好。