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maxingyi木虫 (正式写手)
小马求学
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[求助]
直接把有荧光的量子点溶液和金纳米溶液混合在一块的话，会发生淬灭吗？
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量子点的荧光量资产率很高，而且发射光谱与金纳米的吸收光谱有效重叠，这种情况下，将两者的溶液混在一起，会发生淬灭吗？ 看到很多文献将量子点用DNA修饰，然后用互补DNA修饰金纳米，DNA杂交之后（两者距离<10 nm）发生荧光淬灭，如果没有DNA杂交过程,混合液就没有淬灭发生吗？ 此外，弱问一句，淬灭（quenching）和荧光共振能量转移（FRET）是一回事吗？ 谢谢热心帮助，大家多讨论和交流。 |
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【答案】应助回帖
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感谢参与，应助指数 +1
maxingyi: 金币+10, ★★★很有帮助, 谢谢您不吝赐教。 2012-07-16 10:37:44
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maxingyi: 金币+10, ★★★很有帮助, 谢谢您不吝赐教。 2012-07-16 10:37:44
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如果量子点（供体）的发射光谱和纳米颗粒（受体）的吸收光谱重合有重叠，当两者距离（范围在3nm-8nm）之间，会发生FRET。量子点发射的光通过能量转移到纳米颗粒，纳米颗粒被激发后发射光子。能量传递的效率E=1/(1+(R/R0)^6), 其中R是两者的距离。从光谱上看，如果两者距离达到FRET的范围，供体受到激发后，发射光谱呈现的是受体的发射波段，而非供体的发射波段。 要精确控制量子点和纳米颗粒的距离以达到FRET是一个难点。楼主所说的文献当中将量子点用DNA修饰，然后用互补DNA修饰纳米颗粒，然后DNA杂交，就是用来实现FRET所需的距离。如果没有这种杂交（或者其他方法），直接将量子点与纳米颗粒混合，理论上有一定几率，量子点和纳米颗粒靠得足够近，会发生FRET。但是这种几率是很小的，可以说是一个小概率时间，非常难找。如果加大量子点和纳米颗粒的浓度，这种几率可能会增大，又不能保证单个量子点和单个纳米颗粒的FRET，与实验无益。 置于queching和FRET的区别，楼主尽可以理解为供体的荧光被quenching，但是一般不这样说。quenching一般指单量子体系受到周围环境的影响或者人为的操控使得量子体系的发光产率降低，引起淬灭的机制既有能量的转移，也有量子体系向周围环境的电荷转移（电子转移或者空穴注入）。FRET可以认为是将供体荧光淬灭的手段之一，具体的研究内容还是有区别的。 供楼主参考。 |
10楼2012-07-14 10:20:27
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【答案】应助回帖
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maxingyi: 金币+10, ★★★很有帮助, 谢谢！ 2012-07-16 17:35:49
maxingyi: 金币+10, ★★★很有帮助, 谢谢！ 2012-07-16 17:35:49
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以楼主的问题看来，我觉得需要解释FRET两种不同的情况： 1. 研究目标为单个供体和单个受体之间的作用。如果两者距离达到FRET，供体受到激发后能量传给受体，发出的光只是在受体的发射波段。举个例子，在FRET需要的距离（几个nm），是远远小于衍射极限的，放大倍率再大的显微镜也不可能直接看到两者的分界。所以需要用光学的方法分辨到底有没有单个供体和受体同时存在。如果供体的吸收和发射分别在532nm和640nm，受体的吸收和发射分别在640nm和670nm。那么，如果我用532nm的激光激发，看到670nm的光，很明显证明供体和受体发生了FRET。一个辅助的证明是，如果我用640nm的光直接激发这个区域，探测到670nm的光，证明受体是存在的。 2. 研究目标为大量供体和受体同时高浓度混合。这时候呈现的是大量分子的系综效应。如果用532nm的光激发，在探测的发射光谱肯定会同时存在640nm和670nm，因为不能保证所有供体受到激发后都会有合适的受体发生FRET。在系综中探测光谱是看不到供体是否发生FRET的，只有依靠探测荧光计数的变化。简单的说，有100个供体和100个受体混合，其中有10对满足FRET的距离。那么如果用532nm的光激发，探测640nm的荧光光子计数，供体PL会有一个1/10的减少量。另外我们也可以直接探测670nm的荧光光子计数，在背景基础上有10对FRET的贡献。 研究领域不同，我也不敢妄下结论，只是个人的见解而已。不知道楼主是研究单个的还是系综的？前面有人说的"Considering the inner filter effect, the PL of QDs may also decrease if the concentration of AuNPs is too high, even there is no FRET." 其中的inner filter effect我没有具体考察过，楼主可以考虑一下这是什么状况。 |
12楼2012-07-16 11:27:00
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我个人的观点，用532nm光激发，看670nm区域的荧光强度比较合适。供体发光在640nm，如果选择这个区域的滤光片，看它的荧光强度的减少量，背景肯定会大一些。如果选择合适的滤光片，直接看受体发光670nm的荧光，那么就是在原来的零背景下看一个增加量。简单的说，在暗的背景下看一个光源的打开总比在亮的背景下看一个光源的熄灭要容易一些吧。 其实这两个波段是不冲突的，可以用滤光片把640nm和670nm光分开，同时成像，这样对比更明显。比如两张照片，一张看供体发光640，在发生FRET的区域是暗的，其他区域是亮的。另一张看受体发光670，在发生FRET区域是亮的，其他区域是暗的。两张照片一对比，什么地方发生FRET一目了然。 |
15楼2012-07-16 23:11:50