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coal@live.cn

新虫 (小有名气)

[求助] 这样的RNase能用来提DNA吗?

用上海生工购得的RNase A配制成10mg/ml溶液,附上nano drop的紫外吸光曲线:
如图所示,A280远远低于A230,是不是盐类污染很严重?

另外我尝试用氯仿/异戊醇抽提该酶溶液,也不见中间层有白色,A280值也几乎没下降,请问RNase真的能被氯仿/异戊醇抽提去除吗?

酶溶液的吸光曲线
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coal@live.cn

新虫 (小有名气)

都3天了,还没有人回答吗?
3楼2012-07-14 12:57:34
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查看全部 4 个回答

coal@live.cn

新虫 (小有名气)

现在有了一些进展:我尝试氯仿/异戊醇抽提时加入了1/2体积的tris饱和酚,振荡离心后便出现了很明显的白色中间层,看来之前抽不出蛋白可能是氯仿/异戊醇变性能力太低,要不就是RNase比较特别,没法被氯仿/异戊醇变性。可是之后测吸光值发现A270和A280唰地升到20+mg/ml,再次经过5次氯仿/异戊醇抽提后A270才降下来。
没想到酚残留(酚的吸收峰在270nm)这么严重,还是我抽提的时候有什么细节没掌握,请各位同行指教啊。

然后再问一下大家的RNase A在230nm处会有这么高的吸光度吗?
2楼2012-07-12 20:33:21
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xixi6833866

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-08-04 13:54:31
是可以的,我们做得都还好,您试一下用24:1的氯仿异戊醇抽提后,最后沉淀的时候用1/10醋酸钠和70%乙醇-20度沉淀30min。此外RNAase消化时间不宜过长10-15min即可。
4楼2012-08-04 01:21:02
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