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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 这样的RNase能用来提DNA吗？
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coal@live.cn

新虫 (小有名气)

[求助] 这样的RNase能用来提DNA吗？

用上海生工购得的RNase A配制成10mg/ml溶液，附上nano drop的紫外吸光曲线：
如图所示，A280远远低于A230，是不是盐类污染很严重？

另外我尝试用氯仿/异戊醇抽提该酶溶液，也不见中间层有白色，A280值也几乎没下降，请问RNase真的能被氯仿/异戊醇抽提去除吗？

酶溶液的吸光曲线
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1楼 2012-07-12 16:26:54
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coal@live.cn

新虫 (小有名气)
现在有了一些进展：我尝试氯仿/异戊醇抽提时加入了1/2体积的tris饱和酚，振荡离心后便出现了很明显的白色中间层，看来之前抽不出蛋白可能是氯仿/异戊醇变性能力太低，要不就是RNase比较特别，没法被氯仿/异戊醇变性。可是之后测吸光值发现A270和A280唰地升到20+mg/ml，再次经过5次氯仿/异戊醇抽提后A270才降下来。
没想到酚残留（酚的吸收峰在270nm）这么严重，还是我抽提的时候有什么细节没掌握，请各位同行指教啊。

然后再问一下大家的RNase A在230nm处会有这么高的吸光度吗？
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2楼2012-07-12 20:33:21
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coal@live.cn

新虫 (小有名气)
都3天了，还没有人回答吗？
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3楼2012-07-14 12:57:34
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xixi6833866

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-08-04 13:54:31
是可以的，我们做得都还好，您试一下用24:1的氯仿异戊醇抽提后，最后沉淀的时候用1/10醋酸钠和70%乙醇-20度沉淀30min。此外RNAase消化时间不宜过长10-15min即可。
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4楼2012-08-04 01:21:02
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