应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » soe pcr
91/1返回列表
查看: 1686  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

凤凰城边

银虫 (正式写手)

[求助] soe pcr

最近在做重叠延伸PCR，但是现实是骨感的啊。我用mixture做的pcr，不知是否有影响？两个小片段都能够P出来，但是无法overlap。做overlap的时候我是加入片段1和2约75ng，不知量是多还是少？先做8个 循环之后加入引物，在做25个循环，结果没有连接上。

求购人指点迷津！
回复此楼

» 猜你喜欢
爱拼才会赢
1楼 2012-07-12 11:27:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tianyinghu

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
凤凰城边: 金币+10, ★★★很有帮助 2012-07-13 09:56:21
干嘛先做8个循环呢，直接正常PCR程序就好，模板多加点，加到200ng，不知道你的片段多长，还有叠加PCR接头很重要，不知道你接头多少BP。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2012-07-12 13:04:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ranger04

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可以试试先用较低退火温度做5-个循环，然后用正常退火温度最最后的循环。模板量似乎没有太大的影响
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2012-07-12 13:49:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

凤凰城边

银虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by tianyinghu at 2012-07-12 13:04:33
干嘛先做8个循环呢，直接正常PCR程序就好，模板多加点，加到200ng，不知道你的片段多长，还有叠加PCR接头很重要，不知道你接头多少BP。

我的俩个小片段是6oo bp，接头时16个碱基
赞一下 回复此楼
爱拼才会赢
4楼2012-07-12 15:09:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

凤凰城边

银虫 (正式写手)
按照普通PCR，结果是有非特异性条带。有点糊的感觉
赞一下 回复此楼
爱拼才会赢
5楼2012-07-12 20:19:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

陈年芬芳

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
按照普通PCR程序来吧，我之前做过，退火温度从62一直做到了49，又还再来了一遍，不是不出条带就是模糊，杂带。好在最后条件还是确定了，很折腾。没有必要先做8个循环。各个量也需要自己根据电泳结果来调整。
赞一下(1人) 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

凤凰城边
6楼2012-07-13 09:06:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

凤凰城边

银虫 (正式写手)
送鲜花一朵
引用回帖:
6楼: Originally posted by 陈年芬芳 at 2012-07-13 09:06:11
按照普通PCR程序来吧，我之前做过，退火温度从62一直做到了49，又还再来了一遍，不是不出条带就是模糊，杂带。好在最后条件还是确定了，很折腾。没有必要先做8个循环。各个量也需要自己根据电泳结果来调整。

谢谢，我会接着试试的！！以后还要向你请教啊！
赞一下 回复此楼
爱拼才会赢
7楼2012-07-13 09:55:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tianyinghu

金虫 (小有名气)
你接头太少了，建议25个以上，这样叠加更保险点，别为了省引物钱，省那点钱，你后面的钱会花的更多。
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2012-07-13 11:04:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

piaoyunokok

木虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by tianyinghu at 2012-07-13 11:04:58
你接头太少了，建议25个以上，这样叠加更保险点，别为了省引物钱，省那点钱，你后面的钱会花的更多。

你好，请问一下，接头引物一般是怎样设计的呢？根据每段基因设计的各是多少啊？我做的那个是将近40个呢。与两个片段互补的约各20个，是不是太长了，一直没做出来。。。
赞一下 回复此楼
9楼2012-10-15 18:46:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 凤凰城边 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 6GojgJvkDudM 2026-08-16 3/150 2026-08-17 09:49 by xLVPIRuSvCUe
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +32 医学老男孩 2026-08-13 74/3700 2026-08-16 21:05 by 医学老男孩
[论文投稿] 岩土工程学报什么时候才能终审完呐 25+3 yeager111 2026-08-10 4/200 2026-08-16 20:42 by tfang
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +13 archvillain 2026-08-15 25/1250 2026-08-16 20:13 by zhaosm1982
[基金申请] 快农历七夕节了，轻松一下，男人悄悄话，女施主请不要进来。 +3 Tide man 2026-08-14 3/150 2026-08-16 17:47 by jurkat.1640
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜？ +9 Ldrop2023 2026-08-13 9/450 2026-08-16 13:24 by wukun_007
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +7 启萌科技 2026-08-12 26/1300 2026-08-16 12:35 by 启萌科技
[基金申请] 我的国基提前知道中了，可是同事的操作让我实在接受不了，怎么会有这样的人 +11 家与远方 2026-08-10 16/800 2026-08-16 10:28 by ray43
[基金申请] 有时候，自然基金真的不能太认真 （我的申报经验） +10 majunge000 2026-08-11 12/600 2026-08-16 08:18 by xli1984
[精细化工] 招聘 金属平磨液，抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +10 majunge000 2026-08-10 13/650 2026-08-15 12:26 by hanpeng972
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果？ +4 yuleib84 2026-08-11 4/200 2026-08-14 23:05 by lfy8008
[基金申请] filecode +15 documentary 2026-08-10 17/850 2026-08-14 10:08 by kissu88
[基金申请] FileCode能看出啥？ +10 要乐观耀哥 2026-08-10 32/1600 2026-08-14 09:37 by 要乐观耀哥
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] 结合人工智能，周易传统文化，filecode打分制来了，3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见，大家看看几个A，几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[基金申请] 什么时候出结果，有咨询渠道？？？ +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭