2楼: Originally posted by tianyinghu at 2012-07-12 13:04:33
干嘛先做8个循环呢，直接正常PCR程序就好，模板多加点，加到200ng，不知道你的片段多长，还有叠加PCR接头很重要，不知道你接头多少BP。

6楼: Originally posted by 陈年芬芳 at 2012-07-13 09:06:11
按照普通PCR程序来吧，我之前做过，退火温度从62一直做到了49，又还再来了一遍，不是不出条带就是模糊，杂带。好在最后条件还是确定了，很折腾。没有必要先做8个循环。各个量也需要自己根据电泳结果来调整。

8楼: Originally posted by tianyinghu at 2012-07-13 11:04:58
你接头太少了，建议25个以上，这样叠加更保险点，别为了省引物钱，省那点钱，你后面的钱会花的更多。