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凤凰城边

银虫 (正式写手)

[求助] soe pcr

最近在做重叠延伸PCR,但是现实是骨感的啊。我用mixture做的pcr,不知是否有影响?两个小片段都能够P出来,但是无法overlap。做overlap的时候我是加入片段1和2约75ng,不知量是多还是少?先做8个 循环之后加入引物,在做25个循环,结果没有连接上。

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陈年芬芳

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
按照普通PCR程序来吧,我之前做过,退火温度从62一直做到了49,又还再来了一遍,不是不出条带就是模糊,杂带。好在最后条件还是确定了,很折腾。没有必要先做8个循环。各个量也需要自己根据电泳结果来调整。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

6楼2012-07-13 09:06:11
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