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bolomeer

铜虫 (小有名气)

[交流] 质粒提取 已有8人参与

我质粒的大小是5368bp,为什么质粒提取后电泳条大这么不在5368bp,而落在更大的条带?为什么两次酶切都出现降解?从电泳图谱看我的实验算不算成功,如果不成功的话,还有哪些需要改进的地方?

质粒条带



酶切条带
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bolomeer

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by sadc at 2012-07-12 21:43:37
太多问题了:
1. 提的质粒,蛋白污染特别严重,上样孔那么亮,这可能都要直接干扰酶切了;
2. 质粒没有酶切前,跑出来的大小肯定和线性的Marker大小不一样的,通常有比较明显的3条带;
3. 酶切的质粒浓度太低了, ...

你们做质粒提取和质粒酶切的电泳条件是多少,我用的是0.7%的凝胶,130V,15min。
11楼2012-07-14 21:04:29
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Marado

金虫 (正式写手)

Dreamer

★ ★ ★ ★
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小丹木木: 金币+3, 鼓励交流 2012-07-12 13:55:20
第一张图:点样孔比较亮,可以看出应该是有蛋白质污染,可以测测A260/A280,估计比值在1.8以下,手工提的吧?提的质量不太好,建议换试剂盒提,或者重新提一次.
第二张图:最右边泳道是mark吧,酶切体系是多少,质粒加了多少,量太少了,基本看不出酶切结果,建议加大质粒量酶切,电泳图太模糊了.
Look,ifyouhadoneshot,oroneopportunity,toseizeeverythingyoueverwanted,inonemoment.Wouldyoucaptureit,orjustletitslip?
2楼2012-07-12 09:16:43
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applexixixi

木虫 (小有名气)

★ ★ ★
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小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-07-12 13:55:32
第一张图靠近点样孔的是蛋白,手工提的质粒都难免,我每次提再怎么细心也有蛋白条带。
第二张酶切的图,是单酶切还是双酶切?看位置不像在5kb附近,而且条带太浅。
楼主的图为什么这么不清楚呢?是胶不干净吗,还是有气泡,视觉效果很不好,应该改进一下
3楼2012-07-12 09:34:47
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windsor2011

银虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
质粒纯度低,重提。另外调整酶切体系
只要功夫深铁杵磨成针
4楼2012-07-12 11:50:15
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