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Marado金虫 (正式写手)
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连接频频出问题，有没有高人指点一下 已有2人参与
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本人要连一段1926bp的片段到T载体pMD19-T（2692bp）上面，按理说不算大片段吧，可是连接老连不上去，第一次连的时候考虑到目的片段回收后浓度不大，所以加大了模板的量，做了模板：T载体，5:1,7:1,10:1三个梯度，菌倒是长了不少，挑了5个单菌落，验证后发现都没有连上 昨天第二次连接，做了两种体系，连接体系如下： 体系一 模板：2ul T载体：0.5ul solution I：3.5ul 体系二 模板：2.5ul T载体：0.5ul solution I：3.5ul 连接时间10h，涂氨苄平板过夜 今天一看平板发现就体系一两个平板长了，加起来才三个菌落 还说不准三个都是阳性克隆 挑出来了，准备明早验证了.有谁推荐个体系麽，胶回收后点了5ul的模板跑了下看，感觉浓度还成，之前浓度更低都连得上，氨苄平板没问题的，新配的，浓度也没问题的，100ug/ml的终浓度，培养基冷却到50℃的时候才加进去的. |
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