| 查看: 1692 | 回复: 1 | ||
[求助]
基因敲除问题请教，都是假阳性，根本筛不到突变株
|
|
位高手，我目前做空肠弯曲菌缺失株这一块。 我以T载体作为自杀质粒（对空弯而言），构建敲除基因的上下游臂，各1000bp，将其拼接连接到他T载体中，然后电转化导入空肠弯曲菌中，先以T载体上的AMP抗性筛一次同源重组，PCR鉴定以有两条带(野生型，突变性)为阳性，这一步就很多假阳性，好不容易筛到一次同源重组后，在无抗板子上传代筛二次同源重组，传了一代就发现所有菌落都回复了，只有野生型一条带。 做了好长时间了，一直没有进展，大家有没有什么好的建议啊？  一次同源重组 |
回复此楼» 猜你喜欢
能否退出参与的面上项目解除限项
已经有14人回复
-
2026国自然函评费到账
已经有18人回复
-
建议基金发布提前给出明确的时间点
已经有15人回复
-
范进中举一文的中心思想
已经有7人回复
-
朋友圈看到的
已经有9人回复
-
让我中一个面上吧！
已经有16人回复
-
放榜前的不淡定
已经有17人回复
-
科研孤儿太难了
已经有19人回复
-
明天应该可查了！？
已经有4人回复
-
什么时候开奖？
已经有11人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 同一个菌株接种于不同培养基，已发现其形态差别很大，那么其次生代谢产物会不一样吗？
已经有10人回复
- 想请教一下，我溶液中有机物怎么没有了
已经有45人回复
- 请教大家一种高硅氧纤维布的浸渍材料
已经有3人回复
- 【初学者计算模拟请教】单个纳米银颗粒与垂直入射光的相互作用
已经有11人回复
- 原核基因敲除抗性基因的问题
已经有4人回复
- 基因敲除细胞阳性纯和子筛选
已经有10人回复
- 【求助/交流】酿酒酵母URA3基因敲除的问题
已经有30人回复
- 【求助/交流】求助：关于基因敲除后对下游基因的影响相关问题？
已经有5人回复
- 【求助/交流】请教基因敲除问题
已经有6人回复
- 【求助/交流】基因敲除问题
已经有5人回复
- 【求助/交流】关于基因敲除
已经有21人回复
stue
铁虫 (初入文坛)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 283.1
- 帖子: 26
- 在线: 197.2小时
- 虫号: 1576389
- 注册: 2012-01-13
- 性别: GG
- 专业: 病原微生物变异与耐药
2楼2012-09-12 23:21:23
20