| 查看: 1606 | 回复: 1 | ||
[求助]
基因敲除问题请教，都是假阳性，根本筛不到突变株
|
|
位高手，我目前做空肠弯曲菌缺失株这一块。 我以T载体作为自杀质粒（对空弯而言），构建敲除基因的上下游臂，各1000bp，将其拼接连接到他T载体中，然后电转化导入空肠弯曲菌中，先以T载体上的AMP抗性筛一次同源重组，PCR鉴定以有两条带(野生型，突变性)为阳性，这一步就很多假阳性，好不容易筛到一次同源重组后，在无抗板子上传代筛二次同源重组，传了一代就发现所有菌落都回复了，只有野生型一条带。 做了好长时间了，一直没有进展，大家有没有什么好的建议啊？  一次同源重组 |
回复此楼» 猜你喜欢
材料与化工328分调剂
已经有3人回复
-
279分求调剂 一志愿211
已经有20人回复
-
293求调剂
已经有3人回复
-
一志愿华东理工大学081700，初试分数271
已经有6人回复
-
085404电子信息284分求调剂
已经有3人回复
-
306求0703调剂一志愿华中师范
已经有9人回复
-
一志愿吉大化学322求调剂
已经有6人回复
-
求调剂
已经有5人回复
-
344求调剂
已经有3人回复
-
一志愿哈工大，085400，320，求调剂
已经有3人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 同一个菌株接种于不同培养基，已发现其形态差别很大，那么其次生代谢产物会不一样吗？
已经有10人回复
- 想请教一下，我溶液中有机物怎么没有了
已经有45人回复
- 请教大家一种高硅氧纤维布的浸渍材料
已经有3人回复
- 【初学者计算模拟请教】单个纳米银颗粒与垂直入射光的相互作用
已经有11人回复
- 原核基因敲除抗性基因的问题
已经有4人回复
- 基因敲除细胞阳性纯和子筛选
已经有10人回复
- 【求助/交流】酿酒酵母URA3基因敲除的问题
已经有30人回复
- 【求助/交流】求助：关于基因敲除后对下游基因的影响相关问题？
已经有5人回复
- 【求助/交流】请教基因敲除问题
已经有6人回复
- 【求助/交流】基因敲除问题
已经有5人回复
- 【求助/交流】关于基因敲除
已经有21人回复
stue
铁虫 (初入文坛)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 283.1
- 帖子: 26
- 在线: 197.2小时
- 虫号: 1576389
- 注册: 2012-01-13
- 性别: GG
- 专业: 病原微生物变异与耐药
2楼2012-09-12 23:21:23
