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[求助]
基因敲除问题请教，都是假阳性，根本筛不到突变株
位高手，我目前做空肠弯曲菌缺失株这一块。
我以T载体作为自杀质粒（对空弯而言），构建敲除基因的上下游臂，各1000bp，将其拼接连接到他T载体中，然后电转化导入空肠弯曲菌中，先以T载体上的AMP抗性筛一次同源重组，PCR鉴定以有两条带(野生型，突变性)为阳性，这一步就很多假阳性，好不容易筛到一次同源重组后，在无抗板子上传代筛二次同源重组，传了一代就发现所有菌落都回复了，只有野生型一条带。
做了好长时间了，一直没有进展，大家有没有什么好的建议啊？
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一次同源重组 |
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