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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 链霉菌接合转移
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xiajuan9

新虫 (小有名气)

[交流] 链霉菌接合转移 已有7人参与

有哪位前辈知道链霉菌接合转移最关键的是什么？本人做链霉菌，构建好了质粒从大肠杆菌ET12567/pUZ8002带质粒的菌往链霉菌转化，总转不进去，有没有别的更好的方法？该注意什么呢？
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小小亚杰

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1楼 2012-06-22 10:50:17
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克隆大虾

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
可以先尝试pSET152载体 ，进行摸索，建立遗传转化体系。一般链霉菌相对容易接合转移...
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4楼2012-06-25 06:14:04
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doriscc

金虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你应该把你做的具体步骤说的详细点，这样可以对症下药。一般整合型的是比较容易的，同源重组的效率会低很多。
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2楼2012-06-23 21:14:56
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小小亚杰

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
送鲜花一朵
理论上这样做就行了，但根据不同的链霉菌，接合转移程度不同。
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3楼2012-06-24 15:55:07
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xiajuan9

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by doriscc at 2012-06-23 21:14:56
你应该把你做的具体步骤说的详细点，这样可以对症下药。一般整合型的是比较容易的，同源重组的效率会低很多。

嗯，之前有摸条件，用的是整合型质粒pMT3，能够转进去，虽然效率不高，但是能长出转化子。后来就怎么也转化不成功，尝试过降热激温度降低为42度，15min及45度10min，孢子复苏时间延长6小时以上，甚至换过复苏液。均没效果。怎么办？还可以从哪些方面可以改进呢？
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5楼2012-07-04 21:19:00
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