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wangchangs银虫 (初入文坛)
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纳豆激酶的测定方法 已有2人参与
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| 请问测定纳豆激酶的比较好的方法是什么?我查看文献,最常用的是琼脂糖——纤维蛋白平板法,但我没有找到具体操作步骤,请问大家谁有具体的操作步骤,可以共享下! |
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释天1
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【答案】应助回帖
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(1)试剂0.01mol/L磷酸盐缓冲液(pH7.8) 取磷酸氢二钠3.58g,加水 使溶解并稀释至1000mL为A液;取磷酸二氢钠(NaH PO ·2H 0)0.78g,加水使溶解并稀释至500mL为B 液;将A、B两液混合至pH值为7.8。 工作溶液取0.01 mol/L磷酸盐缓冲液(pH7.8)与0.9%氯化钠溶液(1:17)混合。 1.5%琼脂糖溶液取琼脂糖1.5g,加工作溶液100mL加热溶解。 纤维蛋白原溶液取纤维蛋白原适量,加工作溶液制成每lmL中含1.5mg的可凝蛋白溶液。 凝血酶溶液取凝血酶,加0.9%氯化钠溶液制成每1mL中含1 BP单位的溶液。 (2)标准品溶液的制备 取蚓激酶标准品,用0.9%氯化钠溶液制成浓度分别为每lmL中含10000, 8000,6000,4000,2000蚓激酶单位的溶液。 (3)供试品溶液的制备取本品适量,加0.9%氯化钠溶液使溶解并稀释成标准曲线范围内的浓度。 (4)测定法取纤维蛋白原溶液39mL,置烧杯中,边搅拌边加入55℃琼脂糖溶液39mL、凝血酶溶液 3.0mL,立即混匀,快速倒入直径14cm塑料培养皿中,室温水平放置1小时,打孔。精密量取不同浓度的蚓 激酶标准品溶液及供试品溶液各10 ,分别点在同一平皿中,加盖,置37℃恒温箱中反应18小时。取出后 用卡尺测量溶圈垂直两直径,以蚓激酶标准品单位数的对数为横坐标,垂直两直径乘积的对数为纵坐标,计 算回归方程,将供试品垂直两直径乘积的对数代人回归方程,计算供试品效价单位数。标准品与供试品应各 做两点,以平均值计算。 |
2楼2014-04-11 09:36:16
tianzhibin
至尊木虫 (著名写手)
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3楼2014-04-11 11:21:15










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