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wangwu0628金虫 (初入文坛)
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兰科花粉离体萌发
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最近一直在做虾脊兰的花粉管萌发的实验，培养基主要成分是蔗糖和硼酸，设置了好几个浓度梯度，10%，15%，20%蔗糖；0.001%，0.002%，0.003%硼酸；0.001%，0.002%，0.003%氯化钙，0.7%琼脂。温度保持在25℃。分别在培养12个小时和24个小时后镜检均为看到花粉管萌发。不知道哪里除了问题？找高手请教下： 1.培养基配方是否可以需要调整？ 2.是否需要调PH？一般是维持在5.8-6.5吗？ 3.培养时间是长了还是短了？ 4.兰花为花粉块，采用什么方法将其弄散最好？我一直是轻敲花粉块感觉不是很理想。 |
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【答案】应助回帖
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wangwu0628: 金币+20, ★有帮助 2012-06-23 10:54:06
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花粉不萌发，最主要的原因是没有调pH值。用MES的缓冲体系，具体pH需参照前人的研究。 先配置除琼脂之外的培养基成分，将兰花花粉块放入，振荡使之均匀散开。然后将含花粉的这种培养基与1.4%的琼脂等体积混合，之后用枪头吸取溶液加到培养容器中。待琼脂凝胶后，转入培养箱内培养即可。 |
wangwu06282楼2012-06-22 22:28:01
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3楼2012-06-22 22:33:57
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【答案】应助回帖
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琼脂的最低凝结浓度是0.7%，再低了就不能形成固体凝胶。琼脂有颜色，如果你要镜检计数，建议还是换成琼脂糖，这个形成的凝胶是无色的，看共聚焦显微镜都没问题。 同属兰科，别的文献上的配方对你的这个种应该同样适用。我以前培养百合花粉的培养基在松科植物的花粉上同样work。 百合的formula大致如下： 硼酸0.01%， CaCl2或Ca(NO3)2 0.03%，10mM MES（0.19525%），其它成分省略未写。 KOH调节pH，具体值需参照文献，不同植物会不一样。10mM MES应该也适用于兰花花粉。 1.4%/2=0.7%，等体积混合的终浓度不就是0.7%？ |
8楼2012-06-23 17:32:21
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shangdee
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【答案】应助回帖
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问题主要可能出现在以下几方面： 1、时间太久，多数花粉在适宜条件下，0.5-5小时就能萌发 2、花粉本身失去了活性，你怎么做都是白搭 3、琼脂略高，且没有保湿培养，花粉萌发过程中的湿度保持很重要 以上几点中，我觉得花粉的问题可能是关键，好好看一下别人是怎么收集保存花粉的，对你会有帮助 |
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5楼2012-06-23 09:03:00
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