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wangwu0628

金虫 (初入文坛)

[求助] 兰科花粉离体萌发

最近一直在做虾脊兰的花粉管萌发的实验,培养基主要成分是蔗糖和硼酸,设置了好几个浓度梯度,10%,15%,20%蔗糖;0.001%,0.002%,0.003%硼酸;0.001%,0.002%,0.003%氯化钙,0.7%琼脂。温度保持在25℃。分别在培养12个小时和24个小时后镜检均为看到花粉管萌发。不知道哪里除了问题?找高手请教下:
1.培养基配方是否可以需要调整?
2.是否需要调PH?一般是维持在5.8-6.5吗?
3.培养时间是长了还是短了?
4.兰花为花粉块,采用什么方法将其弄散最好?我一直是轻敲花粉块感觉不是很理想。
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lpsdau

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by wangwu0628 at 2012-06-23 08:57:09
琼脂浓度是不是大了点?这个MES缓冲体系不是很懂能否说的详细点!...

花粉管生长需要硼、钙、氯等离子参与结构组成和渗透调节。亚顶端还有一个碱化带,也就是说花粉管与培养液是有质子交换的。如果没有缓冲体系,时间长了培养基内的质子浓度会有较大变化,这样就会阻碍了花粉管的生长。
10楼2012-06-23 17:45:44
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lpsdau

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
wangwu0628: 金币+20, 有帮助 2012-06-23 10:54:06
SongQ5285: 金币+2, 鼓励积极应助 2012-06-23 15:24:47
花粉不萌发,最主要的原因是没有调pH值。用MES的缓冲体系,具体pH需参照前人的研究。
先配置除琼脂之外的培养基成分,将兰花花粉块放入,振荡使之均匀散开。然后将含花粉的这种培养基与1.4%的琼脂等体积混合,之后用枪头吸取溶液加到培养容器中。待琼脂凝胶后,转入培养箱内培养即可。

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2楼2012-06-22 22:28:01
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lpsdau

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
SongQ5285: 金币+2, 鼓励交流 2012-06-23 15:24:58
钙和硼是必需的,蔗糖的浓度还是不要很高,太高会长菌,甚至会造成高渗胁迫。我以前培养的是裸子植物的花粉管,使用MES的缓冲体系是关键。
3楼2012-06-22 22:33:57
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wangwu0628

金虫 (初入文坛)

送鲜花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by lpsdau at 2012-06-22 22:28:01
花粉不萌发,最主要的原因是没有调pH值。用MES的缓冲体系,具体pH需参照前人的研究。
先配置除琼脂之外的培养基成分,将兰花花粉块放入,振荡使之均匀散开。然后将含花粉的这种培养基与1.4%的琼脂等体积混合,之后 ...

琼脂浓度是不是大了点?这个MES缓冲体系不是很懂能否说的详细点!
4楼2012-06-23 08:57:09
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