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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 动植物 » 综合其他 » 兰科花粉离体萌发
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wangwu0628

金虫 (初入文坛)

舞

[求助] 兰科花粉离体萌发

最近一直在做虾脊兰的花粉管萌发的实验，培养基主要成分是蔗糖和硼酸，设置了好几个浓度梯度，10%，15%，20%蔗糖；0.001%，0.002%，0.003%硼酸；0.001%，0.002%，0.003%氯化钙，0.7%琼脂。温度保持在25℃。分别在培养12个小时和24个小时后镜检均为看到花粉管萌发。不知道哪里除了问题？找高手请教下：
1.培养基配方是否可以需要调整？
2.是否需要调PH？一般是维持在5.8-6.5吗？
3.培养时间是长了还是短了？
4.兰花为花粉块，采用什么方法将其弄散最好？我一直是轻敲花粉块感觉不是很理想。
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1楼 2012-06-21 17:44:32
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wangwu0628

金虫 (初入文坛)

舞
引用回帖:
3楼: Originally posted by lpsdau at 2012-06-22 22:33:57
钙和硼是必需的，蔗糖的浓度还是不要很高，太高会长菌，甚至会造成高渗胁迫。我以前培养的是裸子植物的花粉管，使用MES的缓冲体系是关键。

那钙和硼的浓度呢？我这个合适吗?
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6楼2012-06-23 09:03:03
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lpsdau

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wangwu0628: 金币+20, ★有帮助 2012-06-23 10:54:06
SongQ5285: 金币+2, 鼓励积极应助 2012-06-23 15:24:47
花粉不萌发，最主要的原因是没有调pH值。用MES的缓冲体系，具体pH需参照前人的研究。
先配置除琼脂之外的培养基成分，将兰花花粉块放入，振荡使之均匀散开。然后将含花粉的这种培养基与1.4%的琼脂等体积混合，之后用枪头吸取溶液加到培养容器中。待琼脂凝胶后，转入培养箱内培养即可。
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wangwu0628
2楼2012-06-22 22:28:01
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lpsdau

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
SongQ5285: 金币+2, 鼓励交流 2012-06-23 15:24:58
钙和硼是必需的，蔗糖的浓度还是不要很高，太高会长菌，甚至会造成高渗胁迫。我以前培养的是裸子植物的花粉管，使用MES的缓冲体系是关键。
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2012-06-22 22:33:57
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wangwu0628

金虫 (初入文坛)

舞
送鲜花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by lpsdau at 2012-06-22 22:28:01
花粉不萌发，最主要的原因是没有调pH值。用MES的缓冲体系，具体pH需参照前人的研究。
先配置除琼脂之外的培养基成分，将兰花花粉块放入，振荡使之均匀散开。然后将含花粉的这种培养基与1.4%的琼脂等体积混合，之后 ...

琼脂浓度是不是大了点？这个MES缓冲体系不是很懂能否说的详细点！
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4楼2012-06-23 08:57:09
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