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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 请问为什么用EB染出来的胶都是半块都亮了
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lishenchi

新虫 (初入文坛)

[求助] 请问为什么用EB染出来的胶都是半块都亮了

开始是用GOLDVIEW，染出来紫外下上半块都有着色，后来换EB，还是这样，凝胶成像仪没有问题，电泳条件是60V，请问这种情况可能是什么原因呢？谢谢各位
跟紫外灯管也没有关系啊，因为我把胶转了90度，还是这样的，紫外每根都是好的
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1楼 2012-06-14 19:20:01
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shoppinggirl

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励交流经验哦 2012-06-15 13:43:45
在我以前的实验室也遇到过这种情况，但不影响发文章，所以就没有纠正了。分子克隆上写的是室温清水漂洗20min，可以降低由未结合的EB所引起的背景荧光。你试下洗洗，不过也不用20分钟，一下就好。感觉也可能是加EB过多的原因；还有就是你的制胶版是否水平，从图中看可能向梳子那端倾斜，EB浓度大。
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2楼2012-06-14 19:32:54
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lishenchi

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by shoppinggirl at 2012-06-14 19:32:54
在我以前的实验室也遇到过这种情况，但不影响发文章，所以就没有纠正了。分子克隆上写的是室温清水漂洗20min，可以降低由未结合的EB所引起的背景荧光。你试下洗洗，不过也不用20分钟，一下就好。感觉也可能是加EB过 ...

谢谢楼上，EB是按正常的加呀，别人加这个浓度没有问题也，
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3楼2012-06-14 19:40:13
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nemo88

禁虫 (小有名气)
感谢参与，应助指数 +1
本帖内容被屏蔽
4楼2012-06-14 19:41:59
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wqj1988926

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励交流经验哦 2012-06-15 13:44:01
这个是因为楼主把EB直接加入胶里的原因，EB在电泳的时候也会与胶有相对的泳动，与DNA的电泳方向是相反的，在用凝胶呈现仪拍照的时候就会出现这种情况。
一般这种情况不会影响实验结果，所以楼主不必太过担心，但为了图的好看，有一下两种办法：
1.不在胶里加入EB,而在电泳结束后，用EB溶液染色。
2.在电泳缓冲液中加入几滴EB，这样基本就可以解决这种问题了。
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风雪夜归人
5楼2012-06-14 19:57:01
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
引用回帖:
5楼: Originally posted by wqj1988926 at 2012-06-14 19:57:01
这个是因为楼主把EB直接加入胶里的原因，EB在电泳的时候也会与胶有相对的泳动，与DNA的电泳方向是相反的，在用凝胶呈现仪拍照的时候就会出现这种情况。
一般这种情况不会影响实验结果，所以楼主不必太过担心，但为 ...

楼上正解
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6楼2012-06-14 22:04:16
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小白虾

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
EB浓度过高
我之前也遇到过
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飞的更高
7楼2012-06-14 23:31:53
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nemo88

禁虫 (小有名气)
★ ★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流经验 2012-06-15 13:44:33
lishenchi: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-06-18 16:30:23
本帖内容被屏蔽
8楼2012-06-15 08:40:09
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dafeizizhu

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-06-15 13:44:47
从上面学习到不少东西。我们实验室里用的是电泳后再染色。用高浓度的eb染色30min，所谓高浓度就是eb染色液是直接用母液倒进去的，看颜色定的。
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9楼2012-06-15 09:00:11
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