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lishenchi

新虫 (初入文坛)

[求助] 请问为什么用EB染出来的胶都是半块都亮了

开始是用GOLDVIEW,染出来紫外下上半块都有着色,后来换EB,还是这样,凝胶成像仪没有问题,电泳条件是60V,请问这种情况可能是什么原因呢?谢谢各位
跟紫外灯管也没有关系啊,因为我把胶转了90度,还是这样的,紫外每根都是好的
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wqj1988926

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
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小丹木木: 金币+3, 鼓励交流经验哦 2012-06-15 13:44:01
这个是因为楼主把EB直接加入胶里的原因,EB在电泳的时候也会与胶有相对的泳动,与DNA的电泳方向是相反的,在用凝胶呈现仪拍照的时候就会出现这种情况。
一般这种情况不会影响实验结果,所以楼主不必太过担心,但为了图的好看,有一下两种办法:
1.不在胶里加入EB,而在电泳结束后,用EB溶液染色。
2.在电泳缓冲液中加入几滴EB,这样基本就可以解决这种问题了。
风雪夜归人
5楼2012-06-14 19:57:01
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shoppinggirl

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励交流经验哦 2012-06-15 13:43:45
在我以前的实验室也遇到过这种情况,但不影响发文章,所以就没有纠正了。分子克隆上写的是室温清水漂洗20min,可以降低由未结合的EB所引起的背景荧光。你试下洗洗,不过也不用20分钟,一下就好。感觉也可能是加EB过多的原因;还有就是你的制胶版是否水平,从图中看可能向梳子那端倾斜,EB浓度大。
2楼2012-06-14 19:32:54
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lishenchi

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by shoppinggirl at 2012-06-14 19:32:54
在我以前的实验室也遇到过这种情况,但不影响发文章,所以就没有纠正了。分子克隆上写的是室温清水漂洗20min,可以降低由未结合的EB所引起的背景荧光。你试下洗洗,不过也不用20分钟,一下就好。感觉也可能是加EB过 ...

谢谢楼上,EB是按正常的加呀,别人加这个浓度没有问题也,
3楼2012-06-14 19:40:13
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nemo88

禁虫 (小有名气)

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本帖内容被屏蔽

4楼2012-06-14 19:41:59
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